骨復(fù)活湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性激素性股骨頭壞死的干預(yù)作用及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、1骨復(fù)活湯對(duì)激素性股骨頭壞死血液流變學(xué)及脂代謝的影響 目的：探討SANFH的發(fā)病機(jī)制及骨復(fù)活湯對(duì)SANFH血液流變學(xué)及脂代謝的影響。 方法：將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為四組，每組8只，分別為對(duì)照組、模型組、骨復(fù)活湯低劑量組(15g.kg-1)及骨復(fù)活湯高劑量組(30g.kg-1)。每周兩次臀部肌肉注射醋酸潑泥松7.5mg/kg，正常對(duì)照組每周兩次注射等量生理鹽水，骨復(fù)活湯組同模型組一樣，用藥同時(shí)每日給予骨復(fù)活湯灌胃給藥，為了預(yù)防感

2、染所有動(dòng)物每周兩次肌注青霉素(5×104單位/只)，共注射6周。每周稱體重1次，觀察動(dòng)物皮毛、活動(dòng)情況。末次給藥后心臟取血，測(cè)定全血粘度(高切200s-1，低切40s-1)，血漿粘度和紅細(xì)胞壓積。末次給藥后耳中央動(dòng)脈取血分離血清，測(cè)定血清總膽固醇和甘油三酯的含量。組織切片進(jìn)行光鏡觀察及透射電鏡觀察。并進(jìn)行骨復(fù)活湯小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)。四組家兔血液流變學(xué)測(cè)定、血脂測(cè)定資料用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，四組家兔體重、股骨頭空骨陷窩率比較，經(jīng)SAS統(tǒng)計(jì)

3、軟件做正態(tài)性檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)、方差分析、Q檢驗(yàn)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示。 結(jié)果：一般形態(tài)觀察：在試驗(yàn)期內(nèi)，對(duì)照組家兔體重逐漸增加，病理模型組家兔體重逐漸下降，消瘦，皮下脂肪顯著減少，骨復(fù)活湯組(15g.kg-1，30g.kg-1)家兔體重均略有下降，動(dòng)物狀態(tài)均明顯較病理模型組家兔好，6周后，對(duì)照組、骨復(fù)活湯組(15g.kg-1，30g.kg-1)家兔與病理模型組家兔體重比較，有顯著性差異(P＜0.05)，對(duì)照

4、組、骨復(fù)活湯組(15g.kg-1，30g.kg-1)家兔體重相互比較，無顯著性差異(P＞0.05)。血液流變學(xué)檢測(cè)結(jié)果：模型組家兔全血低切粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積均較正常對(duì)照組家兔升高，有顯著性差異(P＜0.01)，骨復(fù)活湯組(15g.kg-1，30g.kg-1)家兔全血低切粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積均較病理模型組家兔降低，有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。血脂測(cè)定結(jié)果：模型組家兔血清總膽固醇和甘油三酯水平均較正常對(duì)照組家兔

5、升高，有顯著性差異(P＜0.01)，骨復(fù)活湯組(15g.kg-1，30g.kg-1)家兔血清總膽固醇和甘油三酯均較病理模型組家兔降低，有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。HE切片及透射電鏡觀察結(jié)果：對(duì)照組股骨頭軟骨下區(qū)軟骨細(xì)胞排列整齊，小血管豐富，骨小梁排列整齊，骨髓內(nèi)組織緊密，軟骨下區(qū)骨髓內(nèi)脂肪細(xì)胞均勻分布，骨板內(nèi)僅見極個(gè)別空骨陷窩；病理模型組家兔股骨頭大量空骨陷窩，髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞明顯增多增大，骨髓內(nèi)出現(xiàn)灶狀出血，透射電鏡見骨

6、細(xì)胞核膜破裂，核濃縮，染色質(zhì)溶解，胞漿內(nèi)可見脂滴，異常肥大的脂肪細(xì)胞壓迫小靜脈，使受壓管腔驟然變窄，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)較大的低電子密度脂滴；骨復(fù)活湯(15g.kg-1，30g.kg-1)組家兔股骨頭空骨陷窩數(shù)均較少、髓腔脂肪細(xì)胞均較少較小，骨小梁稀疏、未見斷裂。對(duì)照組家兔股骨頭空骨陷窩率12.87±2.36，模型組家兔股骨頭空骨陷窩率21.75±2.92，骨復(fù)活湯低劑量組(15g.kg-1)家兔股骨頭空骨陷窩率16.62±2.3

7、9，骨復(fù)活湯高劑量組(30g.kg-1)家兔股骨頭空骨陷窩率15.87±1.88，方差分析：F=18.67，P=0.0001，四組間有顯著性差異，Q檢驗(yàn)：模型組家兔與對(duì)照組及骨復(fù)活湯組(15g.kg-1，30g.kg-1)家兔股骨頭空骨陷窩率比較，有顯著性差異(P＜0.05)，骨復(fù)活湯低劑量組與高劑量組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，無顯著性差異(P＞0.05)，骨復(fù)活湯組(15g.kg-1，30g.kg-1)家兔與對(duì)照組家兔股骨頭空骨陷窩率

8、比較，有顯著性差異(P＜0.05)。骨復(fù)活湯小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)預(yù)試無法測(cè)出LD50，故進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)，給藥后動(dòng)物在7日內(nèi)動(dòng)物一般狀態(tài)良好，毛色光滑、體重增長(zhǎng)、飲食及活動(dòng)未見異常，無一死亡，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。其小鼠灌胃給藥最大藥量為816g生藥/日，相當(dāng)于成人臨床用量的255倍(臨床成人70kg，用量228g生藥/日)。 結(jié)論：大劑量激素引起脂肪代謝紊亂，導(dǎo)致高脂血癥、使骨組織脂代謝紊亂，股骨頭內(nèi)骨細(xì)胞脂肪變性、壞死；

9、引起血液高粘滯狀態(tài)，靜脈內(nèi)瘀滯，股骨頭骨內(nèi)壓升高，骨組織缺血、壞死。骨復(fù)活湯能夠改善家兔SANFH的血流變及脂代謝。而且毒性小。 2骨復(fù)活湯對(duì)激素性股骨頭壞死股骨頭局部細(xì)胞凋亡的影響 目的：探討SANFH的發(fā)病機(jī)制及骨復(fù)活湯對(duì)SANFH股骨頭局部細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：空骨陷窩情況：正常對(duì)照組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞核著色均勻，骨陷窩內(nèi)骨細(xì)胞形態(tài)正常，骨髓內(nèi)骨細(xì)胞分布適中；模型組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞核不著色，形成大量

10、空骨陷窩；骨復(fù)活湯組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞變性，核變扁偏于一側(cè)，骨細(xì)胞核部分著色，骨細(xì)胞分布較對(duì)照組少，空骨陷窩少；仙靈骨葆組兔股骨頭骨髓內(nèi)骨細(xì)胞變性，核變扁偏于一側(cè)，骨細(xì)胞核少部分著色，空骨陷窩少，骨細(xì)胞分布較骨復(fù)活湯組少。正常對(duì)照組家兔空骨陷窩率12.01±2.13，模型組家兔股骨頭空骨陷窩率26.03±4.54，骨復(fù)活湯組空骨陷窩率16.50±2.56，仙靈骨葆組空骨陷窩率17.51±2.98，方差分析：F=26.95，P=0.00

11、01，四組間有顯著性差異，Q檢驗(yàn)：模型組家兔與對(duì)照組、骨復(fù)活湯組(15g.kg-1)及仙靈骨葆組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，有顯著性差異(P＜0.05)，骨復(fù)活湯組(15g.kg-1)家兔與仙靈骨葆組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，無顯著性差異(P＞0.05)，骨復(fù)活湯組(15g.kg-1)、仙靈骨葆組家兔與對(duì)照組家兔股骨頭空骨陷窩率比較，有顯著性差異(P＜0.05)。細(xì)胞凋亡情況：骨細(xì)胞凋亡正常對(duì)照組的標(biāo)本上的骨細(xì)胞凋亡極少，骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為

12、3.10±0.41；在病理模型組的骨標(biāo)本上，可見骨細(xì)胞核中有棕黃色顆粒的陽性細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞，骨髓組織內(nèi)出現(xiàn)大量凋亡的骨細(xì)胞，其骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為30.41±4.91；骨復(fù)活湯組(15g.kg-1)骨細(xì)胞凋亡較病理模型組少，骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為21.93±2.27；仙靈骨葆組的標(biāo)本上，骨細(xì)胞凋亡較病理模型組少，骨細(xì)胞凋亡指數(shù)為23.28±2.47； 結(jié)論：家兔SANFH病程中，骨壞死是通過激素誘導(dǎo)骨細(xì)胞及成骨細(xì)胞的凋亡和壞死共同作用的

13、結(jié)果方式進(jìn)行的；骨復(fù)活湯在改善家兔SANFH的骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞凋亡及壞死方面有一定作用。 3骨復(fù)活湯對(duì)SANFH股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFmRNA表達(dá)的影響 目的：探討骨復(fù)活湯對(duì)SANFH股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFmRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果：顯微鏡下觀察VEGFmRNA表達(dá)分布的情況，股骨頭標(biāo)本在400倍光鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野。AEC染色的陽性表達(dá)為紅色，以血管瘤陽性對(duì)照片中血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中出現(xiàn)的紅

14、色顆粒的染色程度作為VEGFmRNA表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)。淡紅色為(+)，深紅色為(+++)，介于兩者之間為(++)，陰性為(一)。正常的股骨頭組織的高倍鏡下，可以看到在軟骨下微小血竇和骨小梁髓腔內(nèi)的微小血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿有弱陽性(+)表達(dá)；模型組由于微小血管受到破壞，血管內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量減少，微小血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)較少；骨復(fù)活湯組微小血管內(nèi)皮細(xì)胞的VEGFmRNA較高陽性(+++)表達(dá)，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量增加，微小血管數(shù)量增加；仙靈骨葆組微小血管內(nèi)皮細(xì)胞

15、的VEGFmRNA陽性(++)表達(dá)，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量增加，微小血管數(shù)量增加。 結(jié)論：家兔SANFH病程中，激素對(duì)于股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFmRNA表達(dá)有抑制作用；骨復(fù)活湯藥物能夠促進(jìn)股骨頭局部血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性。 4骨復(fù)活湯和髓芯減壓術(shù)治療激素性早期股骨頭壞死的臨床研究 目的：觀察骨復(fù)活湯和髓芯減壓術(shù)與仙靈骨葆和髓芯減壓術(shù)治療SANFH國際分期法Ⅰ、Ⅱ期的臨床療效比較。 結(jié)果：療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)參照《中國中醫(yī)

16、骨傷科雜志》所列標(biāo)準(zhǔn)及臨床經(jīng)驗(yàn)制定。治愈：疼痛完全消失，活動(dòng)后無疼痛，臨床檢查功能正常，X線片及CT顯示骨質(zhì)復(fù)活，骨小梁連續(xù)完整，密度均勻。MRI的T1加權(quán)像低密度區(qū)恢復(fù)正常。顯效：疼痛完全消失，活動(dòng)后無疼痛，臨床檢查功能正常，X線片及CT顯示骨質(zhì)復(fù)活，有明顯的骨修復(fù)，壞死區(qū)明顯減少，骨小梁排列整齊規(guī)則，MRI的T1加權(quán)像低密度區(qū)明顯減小。 結(jié)論：SANFH主要系長(zhǎng)期使用激素藥物，或大量使用，或間斷一次量過大使用激素藥物所致。S

17、ANFH的早期組織學(xué)改變?yōu)榭展窍莞C增多，骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞增生、肥大及間質(zhì)水腫，骨細(xì)胞進(jìn)一步壞死，出現(xiàn)骨小梁和骨髓壞死，并開始部分壞死組織修復(fù)；骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞增生、肥大及間質(zhì)水腫是造成股骨頭內(nèi)骨內(nèi)壓升高的主要原因，是引起SANFH的主要因素之一。髓芯減壓術(shù)治療早期SANFH的療效滿意。骨復(fù)活湯和髓芯減壓術(shù)優(yōu)于仙靈骨葆和髓芯減壓術(shù)治療成人早期SANFH的療效；越早期發(fā)現(xiàn)治療效果越好，早期診斷、早期治療對(duì)本病的療效至關(guān)重要。MRI是目前診斷