去勢(shì)雄兔干眼模型淚腺上皮細(xì)胞凋亡和相關(guān)基因表達(dá)及局部雄激素治療效果的觀察.pdf

1、本研究目的是觀察去勢(shì)雄兔淚液分泌、淚膜穩(wěn)定性變化、淚腺細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)和局部應(yīng)用雄激素治療效果的觀察。 研究方法：取白色健康成年雄性家兔18只(河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)體重(2.0±0.5kg)，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(正常組)、干眼對(duì)照組(干眼組)、干眼治療組(治療組)。制作12只去勢(shì)雄兔(24只眼)干眼模型。[7] 干眼組和治療組分別于去勢(shì)前、去勢(shì)后1、2、3、4、6、8、12周行schirmer試驗(yàn)

2、，淚膜破裂時(shí)間(break-uptime,BUT)及虎紅染色檢測(cè)。同時(shí)治療組在去勢(shì)4周后雙眼點(diǎn)3％的睪酮[8]一日四次，一次一滴。三組分別利用全自動(dòng)酶免發(fā)光分析儀檢測(cè)術(shù)前術(shù)后血清睪酮水平。12周后處死三組兔，取其淚腺、結(jié)膜、角膜及角膜緣組織行病理組織學(xué)觀察，常規(guī)石蠟包理、切片，然后分別進(jìn)行光鏡、TUNEL法及免疫組織化學(xué)研究。 研究結(jié)果： 1.淚液分泌及淚膜穩(wěn)定性的檢查結(jié)果。 1.1正常組和干眼組、治療組在去勢(shì)3

3、周后，淚液浸濕試紙的長(zhǎng)度、淚膜破裂時(shí)間的差異有顯著性(F=6.37P＜0.05；F=6.24P＜0.05)。干眼組、治療組在實(shí)驗(yàn)6周后，治療組淚液浸濕試紙長(zhǎng)度高于干眼組，淚膜破裂時(shí)間長(zhǎng)于干眼組，兩者差異均有顯著性(t=13.27p＜0.01；t=10.031P＜0.01)。 1.2.虎紅染色正常組為陰性。3周后干眼組、治療組為弱陽(yáng)性。8周后治療組為弱陽(yáng)性，干眼組為強(qiáng)陽(yáng)性。 1.3.干眼組、治療組去勢(shì)后血清睪酮明顯低于正常

4、組(F=26.2P＜0.01)。12周后兩實(shí)驗(yàn)組血清睪酮水平無(wú)明顯差異。(T=0.98P＞0.05) 2.組織病理學(xué)觀察干眼組淚腺可見(jiàn)邊界清晰而規(guī)則的腺泡細(xì)胞，腺上皮細(xì)胞小而密集，胞漿萎縮扁平，腺泡腔擴(kuò)大，PAS染色陽(yáng)性物質(zhì)減少；結(jié)膜杯狀細(xì)胞數(shù)量減少，結(jié)膜上皮細(xì)胞排列不規(guī)則，均可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；角膜上皮不完整，細(xì)胞核變小。治療組淚腺上皮近高柱狀，核居基底部，腺腔內(nèi)可見(jiàn)較多的泡狀粘液，PAS染色陽(yáng)性物質(zhì)較干眼組明顯多；結(jié)膜杯狀

5、細(xì)胞數(shù)量較干眼組多，上皮細(xì)胞排列較規(guī)則，淋巴細(xì)胞減少；角膜上皮完整。 3.形態(tài)學(xué)觀察干眼組去勢(shì)后毛發(fā)粗糙，結(jié)膜和瞼緣炎癥明顯，角膜干燥無(wú)光澤。4只眼可見(jiàn)灰白色角膜潰瘍。治療組結(jié)膜和瞼緣炎癥較輕，未發(fā)現(xiàn)角膜潰瘍。 4.淚腺細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)正常組和干眼組、治療組淚腺腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞凋亡平均每高倍視野數(shù)差異性顯著(F=34.5P＜0.05)，Q檢驗(yàn)結(jié)果治療組和正常組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療組和干眼組淚腺上皮細(xì)胞凋亡平均每高

6、倍視野數(shù)差異有極顯著性(T=5.46P＜0.01)。干眼組淚腺導(dǎo)管及腺泡上皮細(xì)胞中可見(jiàn)大量Fas、FasL蛋白陽(yáng)性表達(dá)，F(xiàn)as、FasL陽(yáng)性目標(biāo)平均光密度值(OD)[0.241±0.0330.260±0.025]均明顯高于正常組(0.157±0.01160.162±0.027)。治療組淚腺導(dǎo)管及腺泡上皮細(xì)胞中Fas、FasL蛋白陽(yáng)性表達(dá)較干眼組少，陽(yáng)性目標(biāo)平均光密度值(OD)[0.1639±0.1660.174±0.035]。三組數(shù)據(jù)經(jīng)

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有顯著性(F=52.48P＜0.01；F=48.97P＜0.01)。12周后，干眼組和治療組Fas、FasL陽(yáng)性目標(biāo)平均光密度值(OD)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.026p＜0.05；t=9.054p＜0.05)；淚腺腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞中Fas、FasL蛋白陽(yáng)性平均光密度值與細(xì)胞凋亡數(shù)都成正相關(guān)。(r=0.825p＜0.01；r=0.790p＜0.01) 研究結(jié)論： 1.去勢(shì)后雄兔睪酮水平明顯低下是造成干眼的原因

8、之一。 2.去勢(shì)雄兔通過(guò)組織學(xué)觀察可見(jiàn)淚腺上皮細(xì)胞萎縮、腺泡粘液物質(zhì)減少及結(jié)膜杯狀細(xì)胞減少，淚腺及結(jié)膜可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，導(dǎo)致淚液分泌質(zhì)和量的改變及淚膜穩(wěn)定性的改變。 3.雄激素為免疫抑制劑，有類(lèi)激素樣作用。 4.雄激素能夠抑制淚腺及結(jié)膜炎癥，雄激素水平的高低與干眼癥的淚腺細(xì)胞凋亡和炎癥之間有密切的關(guān)系。 5.局部雄激素治療對(duì)雄激素水平低下干眼治療有效且對(duì)全身雄激素水平無(wú)明顯影響。 6.細(xì)胞凋亡