常規(guī)長(zhǎng)方案降調(diào)節(jié)下PCOS患者的IVF-ICSI-ET妊娠結(jié)局及卵泡液差異表達(dá)蛋白的分析與鑒定.pdf

1、多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是一種臨床常見(jiàn)的因月經(jīng)調(diào)節(jié)機(jī)制失常導(dǎo)致的生殖功能障礙性疾病，育齡期婦女發(fā)病率約為5-10％，是導(dǎo)致不孕的一種常見(jiàn)病因。臨床以功能性高雄激素血癥、持續(xù)不排卵和胰島素抵抗為特征，主要表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)或不規(guī)則陰道出血、不孕、肥胖、多毛、子宮內(nèi)膜過(guò)度增生及惡性變化、以及雙側(cè)或單側(cè)卵巢呈多囊性改變和某些激素水平的改變等。目前，對(duì)于有生育要求的PCOS不孕患者，國(guó)內(nèi)外

2、大多數(shù)生殖中心常采用常規(guī)長(zhǎng)方案降調(diào)節(jié)來(lái)實(shí)施對(duì)PCOS患者的控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation, COH)，再行IVF-ET或ICSI-ET治療來(lái)助孕。然而，利用常規(guī)長(zhǎng)方案COH對(duì)PCOS患者妊娠結(jié)局的影響仍存在爭(zhēng)議，其作用機(jī)理也不是十分清楚。
　　 為了探索常規(guī)長(zhǎng)方案COH對(duì)PCOS患者IVF/ICSI-ET妊娠結(jié)局的影響，并探究其可能的作用機(jī)理，本研究進(jìn)行了以下四個(gè)方面的實(shí)驗(yàn):

3、(1)利用回顧性分析的方法，對(duì)2009年1月～2010年12月在中信湘雅生殖與遺傳專(zhuān)科醫(yī)院生殖中心接受常規(guī)長(zhǎng)方案IVF/ICSI-ET治療的PCOS患者630例共643個(gè)周期和正常患者8217例共8617個(gè)周期進(jìn)行了分析，對(duì)比了PCOS患者和正?；颊叩幕咎卣?、促性腺激素（Gonadotropin releasing hormone，Gn）用量、獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、臨床妊娠率、流產(chǎn)率、抱嬰率和中重度OHSS發(fā)生率等相關(guān)臨床指標(biāo)，

4、探討了常規(guī)長(zhǎng)方案COH對(duì)PCOS患者IVF/ICSI-ET妊娠結(jié)局的影響。(2)利用卵泡液為實(shí)驗(yàn)材料，通過(guò)調(diào)整，優(yōu)化2-DE技術(shù)條件，建立相對(duì)穩(wěn)定的卵泡液蛋白質(zhì)組2-DE分離和MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜鑒定技術(shù)平臺(tái)。(3)以卵泡液為研究對(duì)象，利用2-DE結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)，探討控制性促排卵過(guò)程中PCOS患者與因男方因素引起不育的正?；颊呗雅菀旱鞍踪|(zhì)的差異表達(dá)情況，篩選和鑒定與PCOS卵泡發(fā)育、妊娠相關(guān)的蛋白質(zhì)，并對(duì)這些蛋白質(zhì)的功能進(jìn)行生物

5、信息學(xué)分析。(4)利用Western blot方法，分析了Alpha-1-antitrypsin、Apolipoprotein A-Ⅰ和Transferrin等部分鑒定的蛋白質(zhì)在卵泡液中的表達(dá)情況;利用RT-PCR方法，檢測(cè)了Serine/threonine-protein kinase MAK、DNAdamage-regulated autophagy modulator protein2、Apolipoprotein A-Ⅳ、int

6、erleukin12A subunit alpha和Serine palmitoyltransferase2等五種新鑒定的蛋白質(zhì)的mRNA在顆粒細(xì)胞中的表達(dá)情況。結(jié)果如下:(1)常規(guī)長(zhǎng)方案降調(diào)節(jié)下的PCOS患者在接受IVF/ICSI-ET治療過(guò)程中，與正常患者相比，能夠獲取較多的卵母細(xì)胞，其受精率、臨床妊娠率和取消率等沒(méi)有顯著性差異，而PCOS患者的流產(chǎn)率和中重度OHSS發(fā)生率顯著高于對(duì)照組，抱嬰率顯著性低于對(duì)照組。(2)通過(guò)優(yōu)化各項(xiàng)實(shí)

7、驗(yàn)條件，構(gòu)建了相對(duì)穩(wěn)定的2-DE和MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜鑒定卵泡液蛋白的技術(shù)平臺(tái)。(3)在PCOS患者卵泡液中篩選出了存在顯著性表達(dá)差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)32個(gè)，并鑒定了其中的20種蛋白質(zhì)。其中在PCOS患者卵泡液組分中表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)有Alpha-1-antitrypsin precursor、Apolipoprotein A-Ⅰ precursor、Transthyretin precursor、Vitamin D-bindingp

8、rotein precursor、 Haptoglobin precursor、 Apolipoprotein A-Ⅳprecursor、 Isoform3 of NAD-dependent deacetylase sirtuin-2、 Fibrinogengamma chain precursor、 Fibrinogen beta chain precursor、 Plasmaretinol-binding protein precu

9、rsor、 Alpha-1B-glycoprotein precursor、Tether containing UBX domain for GLUT4和Transferrin等13種，表達(dá)下調(diào)的有Keratin, typeⅠ cytoskeletal9、Serine palmitoyltransferase2、Keratin, typeⅡ cytoskeletal1、Serine/threonine-protein kinase MA

10、K、DNA damage-regulated autophagy modulator protein2、interleukin12Asubunit alpha、 Zinc-alpha-2-glycoprotein precursor等7種。隨后，我們對(duì)鑒定的20種蛋白質(zhì)進(jìn)行了功能分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些蛋白涉及到機(jī)體的胰島素抵抗、脂肪代謝、炎性相關(guān)、及細(xì)胞增殖、凋亡等生理過(guò)程，直接或間接影響了機(jī)體的卵泡發(fā)育和妊娠進(jìn)程。(4) Western

11、blot結(jié)果表明，Alpha-1-antitrypsin、 Apolipoprotein A-Ⅰ和Transferrin三種蛋白質(zhì)在PCOS患者卵泡液中表達(dá)均上調(diào);RT-PCR結(jié)果表明，Serine/threonine-protein kinase MAK、 DNA damage-regulated autophagymodulator protein2和Serine palmitoyltransferase2等三種蛋白質(zhì)的mRNA在P

12、COS患者顆粒細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，提示了這三種卵泡液蛋白質(zhì)來(lái)源于顆粒細(xì)胞的分泌，這些均與質(zhì)譜鑒定的結(jié)果一致，而Apolipoprotein A-Ⅳ和interleukin12A subunit alpha未見(jiàn)在顆粒細(xì)胞中有表達(dá)，提示其可能有其它來(lái)源。
　　 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，常規(guī)長(zhǎng)方案COH后行IVF/ICSI-ET治療的PCOS患者獲得了與正常患者相同的妊娠率，但其流產(chǎn)率和OHSS發(fā)生率顯著增加、而抱嬰率顯著降低，其作用機(jī)理可能與