黑素瘤細(xì)胞凋亡、外毛根鞘無色素性黑素細(xì)胞分離培養(yǎng)以及黑素細(xì)胞樹突體系的研究.pdf

1、第一部分:黑素瘤Cloudman S91細(xì)胞凋亡的研究.在已知三氧化二砷誘導(dǎo)其他腫瘤細(xì)胞凋亡的基礎(chǔ)上,該實(shí)驗(yàn)探討其對(duì)惡性黑素瘤的治療作用.在我們的研究中,Cloudman S91黑素瘤細(xì)胞系來自患惡性黑素瘤的小鼠.MTT還原法檢測(cè)As<,2>O<,3>或順鉑對(duì)S91存活率的影響,AO染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞儀分析凋亡周期,末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸(dUTP)末端標(biāo)記法(TUNEL)原位觀察,計(jì)算平均凋亡指數(shù)

2、.DNA凝膠電泳研究基因組DNA.第二部分:毛囊無色素性黑素細(xì)胞的分離培養(yǎng).研究發(fā)現(xiàn)無色素性黑素細(xì)胞位于毛囊外根鞘的中下部,構(gòu)成皮膚黑素細(xì)胞的儲(chǔ)庫(kù).在該研究中,首先,為了明確外毛根鞘細(xì)胞成分和無色素性黑素細(xì)胞所處位置,我們將拔取的單個(gè)的生長(zhǎng)期毛囊進(jìn)行2﹪的瓊脂預(yù)包埋,7μm連續(xù)切片,分別用KKI/beteb和HMB-45單抗染色.另取毛囊用胰酶消化,收集細(xì)胞,在電子顯微鏡下進(jìn)行觀察.結(jié)果顯示:拔取的正常毛囊外根鞘中存在NKI/beteb

3、陽(yáng)性細(xì)胞,而HMB-45染色陰性.在毛母質(zhì)中有大量的HMB-45陽(yáng)性細(xì)胞.消化的細(xì)胞為有活性的MC、AMMC、毛皮質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞.第二,進(jìn)行毛囊黑素細(xì)胞的分離和培養(yǎng),探討其生物學(xué)特性.第三部分人表皮黑素細(xì)胞、毛囊無色素黑素細(xì)胞和鼠黑素瘤細(xì)胞的原子力顯微鏡觀察.在該研究中,我們首次應(yīng)用原子力顯微鏡觀察體外培養(yǎng)中,MC的形態(tài)和黑素體轉(zhuǎn)運(yùn)方式.結(jié)果顯示:(1)正常人表皮MC胞體為圓形、卵圓形、三角形、四角形,從核周體上伸出8~10個(gè)粗的樹

4、突,在靠近胞體處首次分叉,然后逐步分支,向各方位伸展.從樹突的主干上還可見到線狀突起、生長(zhǎng)錐、和短而圓鈍的突起,這些突起內(nèi)含有排列這的黑素體.除這些結(jié)構(gòu)外,最特征的是從樹突頂端和胞體伸出的偽絲,其間有排列整齊的黑素體.樹突的頂端形成非分叉的寬約1500-2000納米的突起,內(nèi)含2~3個(gè)黑素體,突起上有偽絲伸出.很多突起有一細(xì)頸,將含有黑素體的袋狀結(jié)構(gòu)掐斷,脫離黑素細(xì)胞.(2)S91鼠黑素瘤細(xì)胞只有兩級(jí)分支,其間可見大小不一顆粒(黑素體)