補脾益氣方藥對脾虛哮喘大鼠模型氣道黏液高分泌的影響及機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本課題采用形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)等實驗方法,觀察了補脾益氣方藥治療前、后的脾虛哮喘大鼠模型氣道黏液高分泌、AQP5表達等變化,旨在探討補脾益氣方藥對脾虛哮喘氣道黏液高分泌的影響及機制,為闡明補脾益氣方藥治療脾虛型哮喘的藥理學(xué)機制、以及為中醫(yī)“脾為生痰之源,肺為貯痰之器”的理論提供實驗依據(jù)。
   材料與方法:
   50只Wistar雄性大鼠,按照隨機數(shù)字法分為5組:生理鹽水對照組(對照組),脾虛哮喘模型組(脾虛哮喘

2、組),哮喘模型組(哮喘組),脾虛哮喘中藥治療組(脾虛哮喘治療組),哮喘中藥治療組(哮喘治療組)。脾虛哮喘組和脾虛哮喘治療組首先采用飲食不節(jié)、疲勞過度和苦寒泄下等復(fù)合因素作用建立脾虛模型,共10d。然后,與哮喘模型組和哮喘治療組一起采用卵蛋白致敏和激發(fā)的方法建立哮喘模型。在實驗第11d脾虛模型建立成功后,脾虛哮喘治療組和哮喘治療組給予補脾益氣方藥進行灌胃治療,共21d。
   1.實驗第32d進行外周血和支氣管肺泡灌洗液(BALF

3、)中嗜酸性粒細胞(Eos)百分比測定;采用蘇木素.伊紅(HE)染色法進行肺組織病理形態(tài)學(xué)測定;采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)進行血清總免疫球蛋白E(IgE)含量、血清和BALF中白介素—4(IL—4)、干擾素—γ(IFN—γ)含量及BALF中黏蛋白5AC(MUC5AC)含量測定:采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT—PCR)進行肺組織MUC5AC的mRNA表達水平測定;采用免疫組化法進行肺組織MUC5AC蛋白表達水平測定;
   2

4、.實驗第32d進行肺組織濕/干質(zhì)量比測定;采用RT—PCR.進行肺組織AQP5的mRNA表達水平測定;采用免疫組化法和免疫印跡法進行肺組織AQP5蛋白表達水平的測定:
   3.采用ELISA進行血清和BALF中TNF—α含量測定;采用免疫組化法進行肺組織IkBα蛋白表達水平和NF—kBp65入核率測定。
   結(jié)果:
   1.外周血和BALF中EOS百分比檢測結(jié)果顯示:與對照組比較,脾虛哮喘組與哮喘組均顯著升

5、高(P<0.01),而脾虛哮喘組明顯高于哮喘組(P<0.01);但脾虛哮喘治療組則低于脾虛哮喘組(P<0.01),哮喘治療組低于哮喘組(P<0.01)。
   2.血清和BALF中IL—4和IFN—γ含量、及血清總IgE含量檢測結(jié)果顯示:與對照組比較,脾虛哮喘組和哮喘組血清和BALF中IL—4與血清總IgE含量均顯著升高(P<0.01),而IFN—γ,含量與IFN—γ/IL—4比值均顯著降低(P<0.01);但脾虛哮喘組上述變化

6、較哮喘組更加明顯(P<0.01)。與脾虛哮喘組或哮喘組比較,脾虛哮喘治療組或哮喘治療組血清和BALF中IL—4和血清總IgE含量均降低(P<0.01),而IFN—γ含量與IFN—γ/IL—4比值均升高(P<0.01)。
   3.光學(xué)顯微鏡觀察,可見脾虛哮喘組和哮喘組大鼠的支氣管管壁和伴行動脈周圍有較多的Eos、單核細胞和淋巴細胞浸潤,并且支氣管黏膜皺壁增多、延長,氣管管腔縮小,杯狀細胞增生,基底膜增厚,氣道腔內(nèi)可見炎性分泌物,

7、有的小支氣管被黏液栓和炎性細胞所閉塞。脾虛哮喘治療組和哮喘治療組炎性細胞浸潤、杯狀細胞增生等癥狀得到改善。
   4.大鼠BALF中MUC5AC含量和基因表達結(jié)果顯示:與對照組比較,脾虛哮喘組和哮喘組均顯著升高(P<0.01)。其中脾虛哮喘組表達水平高于哮喘組(P<0.01),經(jīng)治療后,兩治療組基因表達水平均低于治療前水平(P<0.01)。
   5.肺組織濕/干質(zhì)量比值結(jié)果顯示:與對照組比較,脾虛哮喘組和哮喘組均顯著升

8、高(P<0.01),且脾虛哮喘組高于哮喘組(P<0.01)。但是,脾虛哮喘治療組則低于脾虛哮喘組(P<0.01);哮喘治療組則低于哮喘組(P<0.01)。
   6.肺組織AQP5的mRNA和蛋白表達結(jié)果顯示:與對照組比較,脾虛哮喘組和哮喘組均顯著降低(P<0.01),并且脾虛哮喘組低于哮喘組(P<0.01);經(jīng)治療,兩治療組其表達分別高于治療前水平(P<0.01)。
   7.血清和BALF中TNF—α含量測定結(jié)果表明

9、:與對照組比較,脾虛哮喘組和哮喘組均顯著升高(P<0.01),但是脾虛哮喘組和哮喘組組間比較則無差異性(P>0.05)。不過脾虛哮喘治療組顯著低于脾虛哮喘組(P<0.01),哮喘治療組低于哮喘組(P<0.01)。
   8.肺組織IkBα和NF—kBp65的免疫組化結(jié)果表明:與對照組比較,脾虛哮喘組和哮喘組大鼠肺組織IkBα的蛋白表達水平均降低,而NF—kBp65入核率增加(P<0.01),此變化在脾虛哮喘組表現(xiàn)的更為明顯(P<

10、0.01)。但是,經(jīng)過治療后,兩治療組上述變化分別高于、低于治療前(P<0.01)。
   9.相關(guān)性分析結(jié)果:肺組織AQP5的表達水平和BALF中MUC5AC的含量和MUC5AC表達水平呈負相關(guān)。血清和BALF中TNF—α的含量和肺組織IkBα表達水平呈負相關(guān),和肺組織NF—kBp65入核率呈正相關(guān):肺組織NF—kB活性和肺組織AQP5的表達水平呈負相關(guān)。肺組織NF—kB活性和BALF中MUC5AC含量和肺組織MUC5AC的表

11、達水平呈正相關(guān)。
   結(jié)論:
   1.脾虛使哮喘大鼠模型外周血和BALF中EOS百分比、血清IL—4及血清總IgE含量進一步增加,IFN—γ含量進一步下降。補脾益氣方藥能夠?qū)⑵淠孓D(zhuǎn)。
   2.脾虛使哮喘模型大鼠肺組織濕/干質(zhì)量比值、BALF中MUC5AC含量、肺組織MUC5AC表達進一步升高;肺組織AQP5的表達水平進一步降低。補脾益氣方藥均能夠使其不同程度逆轉(zhuǎn)。
   3.補脾益氣方藥能夠降低脾虛

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