施保利通治療小鼠巨細(xì)胞病毒感染的療效觀察及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：觀察施保利通治療小鼠巨細(xì)胞病毒感染的療效并探討其機(jī)制。
　　方法：4周齡SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠，腹腔接種含病毒5×103PFU的病毒液，建立急性全身播散性感染模型，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、施保利通治療組、GCV治療組及施保利通、GCV聯(lián)合治療組。另設(shè)正常對(duì)照組，腹腔注射等容積NS。以接種日為0天，接種后24h起，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組腹腔注射N(xiāo)S，灌服NS;施保利通治療組腹腔注射N(xiāo)S，灌服施保利通550mg/kg; GCV

2、治療組腹腔注射GCV60mg/Kg，灌服NS;聯(lián)合治療組腹腔注射GCV60mg/Kg，灌服施保利通550mg/kg。藥物均以NS為溶媒，腹腔注射容積為0.01ml/10g，灌胃容積為0.2ml/10g，每天1次，共14天。監(jiān)測(cè)小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育情況及體重變化，并于給藥第3、5、7、10、14天末各組分別隨機(jī)處死小鼠5只。半定量PCR法檢測(cè)第7天時(shí)模型對(duì)照組和正常對(duì)照組小鼠肺、肝、脾、腎、心等組織中MCMV-DNA;HE染色觀察各臟器病理改變

3、;CPE法檢測(cè)唾液腺M(fèi)CMV感染性病毒滴度;熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)肺、肝組織MCMV-DNA負(fù)荷量;雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN-γ、IL-10表達(dá)水平;RT-PCR法檢測(cè)脾組織T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表達(dá)強(qiáng)度。
　　結(jié)果：1.聯(lián)合治療組與正常對(duì)照組小鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好，施保利通治療組及GCV治療組小鼠稍落后，模型對(duì)照組明顯落后。第14天時(shí)各組小鼠體重比較:聯(lián)合治療組和正常對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、意義(P＞0.05)，模型對(duì)照組＜施保利通治療組＜GCV治療組＜聯(lián)合治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=57.41，P＜0.01）。
　　2.第7天，模型對(duì)照組小鼠肺、肝、脾、腎、心等組織MCMV-DNA PCR檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，HE染色可見(jiàn)重要臟器出現(xiàn)相應(yīng)的組織病理?yè)p害;正常對(duì)照組未出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，未見(jiàn)相應(yīng)病理改變。
　　3.唾液腺M(fèi)CMV感染性病毒滴度檢測(cè):正常對(duì)照組小鼠各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)呈陰性，其余各組于病毒接種后5天即可檢測(cè)到MC

5、MV。模型對(duì)照組病毒滴度逐漸升高，14天達(dá)高峰。其余各組先迅速升高，7天后施保利通治療組未再有明顯變化，GCV治療組及聯(lián)合治療組降低，14天時(shí)施保利通治療組明顯低于模型對(duì)照組，但較GCV治療組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=117.54，P＜0.05），聯(lián)合治療組檢測(cè)呈陰性。各組病毒滴度峰值比較，施保利通治療組略高于GCV治療組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，均低于模型對(duì)照組，高于聯(lián)合治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=45.06，P＜0.01

6、)。
　　4.肺組織MCMV-DNA負(fù)荷量變化:正常對(duì)照組小鼠檢測(cè)呈陰性，其余各組于接種病毒后3天可檢測(cè)到較高水平MCMV-DNA，7天達(dá)高峰。各組峰值比較，施保利通治療組略高于GCV治療組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），均明顯低于模型對(duì)照組，高于聯(lián)合治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=41.52，P＜0.01)。第14天病毒量比較，聯(lián)合治療組＜GCV治療組＜施保利通治療組＜模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=143.45，P＜0.

7、01)。
　　5.肝組織MCMV-DNA負(fù)荷量變化:變化趨勢(shì)與肺組織類(lèi)似。各組峰值比較，施保利通治療組低于模型對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，均高于GCV治療組，顯著高于聯(lián)合治療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F'=229.63，P＜0.01)。第14天病毒量比較，聯(lián)合治療組＜GCV治療組＜施保利通治療組＜模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F'=908.29，P＜0.01)。
　　6.IFN-γ表達(dá)水平變化:各時(shí)間點(diǎn)正常對(duì)照組無(wú)

8、明顯變化;模型對(duì)照組和施保利通治療組均于第3d達(dá)高峰，前者3天后逐漸降低，第14天與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，后者先迅速降低，7天后回升，第14天時(shí)明顯高于模型對(duì)照組及正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=385.49，P＜0.05)。
　　7.IL-10表達(dá)水平變化:各時(shí)間點(diǎn)正常對(duì)照組無(wú)明顯變化;模型對(duì)照組接種MCMV后逐漸升高，第14天時(shí)達(dá)到較高水平;施保利通治療組先升高，第7天后下降，第14天明顯低于模型對(duì)

9、照組，但仍較正常對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=523.67，P＜0.01)。
　　8.T-bet mRNA表達(dá)強(qiáng)度變化:變化趨勢(shì)與IFN-γ表達(dá)水平類(lèi)似，第14天時(shí)模型對(duì)照組與正常對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，均低于施保利通組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=257.57，P＜0.05)。
　　9.GATA-3 mRNA表達(dá)強(qiáng)度變化:變化趨勢(shì)與IL-10表達(dá)水平類(lèi)似。第14天時(shí)模型對(duì)照組＞施保利通治療組＞正常對(duì)照組，差異有