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文檔簡介
1、本研究采用內(nèi)切酶消化的方法對含有HBV adw2亞型全基因序列的質(zhì)粒pUVN4進行雙酶切，獲取含HBV-RT的片段，將其克隆到大腸桿菌表達載體pQE30中，構(gòu)建了原核表達質(zhì)粒pQE30-RT。 將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒pQE30-RT轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5a中，用IPTG進行了誘導(dǎo)表達。重組菌菌體裂解物經(jīng)SDS-PAGE電泳，可檢測到相對分子量約44KD的重組蛋白，以包涵體形式表達。對表達的重組蛋白用鎳離子柱親和層析法進行純化，經(jīng)SDS
2、-PAGE分析：咪唑濃度為100mM的BufferⅢ能夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛怼?利用表達的重組蛋白作為抗原，初步建立了檢測HBV-RT抗體的間接ELISA方法。結(jié)果表明：抗原的最適包被濃度為1ug/mL，最適包被條件為4℃過夜，待檢血清稀釋度為1：100，HRP-山羊抗人IgG的工作濃度為1：100K。成功地從177份慢性乙肝病人血清中檢測出anti-HBV-RT抗體，大三陽、小三陽和一五陽性的乙肝病人血清中anti-HBV-RT
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