抗人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶ScFv在轉(zhuǎn)基因煙草中表達的初步研究.pdf

1、1983年世界首例轉(zhuǎn)基因植物問世以來，轉(zhuǎn)基因工程得以飛速發(fā)展。1989年Hiatt等人在植物中表達抗體，開創(chuàng)了利用轉(zhuǎn)基因植物表達抗體的先河?，F(xiàn)在多種基因工程抗體、酶、激素、血漿蛋白和疫苗等都已在植物的葉、莖、根、果實、種子以及植物細胞和器官中得到表達。近年來，SARS，禽流感的出現(xiàn)，艾滋病的迅速蔓延，給人類的生命和健康造成了巨大的威脅。因此，以動物生物器作為表達載體的各種抗體的安全性引起了人們高度警惕，利用植物生物器來表達各種對醫(yī)療、診

2、斷、生物研究有著重要作用的抗體成為了科學界的熱點。 近年來研究人員在腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)大約85％的人類惡性腫瘤具有端粒酶活性，因此抑制端粒酶活性為抗腫瘤藥物的設計提供了新的目標，端粒酶抑制劑便成為一種有效的新型抗腫瘤藥物。一些學者的實驗研究結果顯示以端粒酶為靶位點的腫瘤治療策略是可行的。20世紀70年代德國學者：Kohler和英國學者Milstein利用細胞融合技術首次成功地制備出單克隆抗體，與之相比單鏈抗體具有分子量小，免疫原性

3、低，組織穿透力強、血流中半衰期短、特異性好等優(yōu)點，并在原核細胞系統(tǒng)表達，在腫瘤的診斷和治療方面展示了更好的應用前景。 本研究構建含抗人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶單鏈抗體基因ScFv-hTEERT的植物表達載體p1304-SH，通過農(nóng)桿菌介導的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草葉片。轉(zhuǎn)基因煙草植株葉片總DNA的PCR、Southern blot檢測結果表明，ScFv-hTERT基因已整合進了轉(zhuǎn)基因煙草植株基因組中；RT-PCR,SDS-PAGE分析證實目的基因