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文檔簡介
1、目的：構(gòu)建含有人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶( Human Telomerase ReverseTranscriptase，hTERT)啟動(dòng)子的重組表達(dá)載體pEGFP-C3-hTERTp，并觀察其在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況。
方法：1）從抗凝人全血中提取人基因組DNA。2）通過PCR方法擴(kuò)增出hTERTp，將其連接至pGEM-T Easy載體上通過電泳和測序進(jìn)行檢測。3）用PCR擴(kuò)增出來的hTERTp取代pEGFP-C3載體上原有的CMV啟
2、動(dòng)子，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞，并通過PCR、酶切和測序鑒定。4）用脂質(zhì)體LipfectamineTM2000介導(dǎo)質(zhì)粒pEGFP-C3-hTERTp瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人胚腎293A細(xì)胞，48～72h后在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。
結(jié)果：1）瓊脂糖凝膠電泳顯示276bp的hTERTp擴(kuò)增成功，測序結(jié)果與GeneBank中hTERT啟動(dòng)子DNA序列完全一致。2) pEGFP-C3-hTERTp重組質(zhì)粒經(jīng)酶切、
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