人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因反義核酸結(jié)合位點(diǎn)的體外篩選.pdf

1、《中國(guó)圖書資料分類法》分類號(hào)單位代碼：10660分類號(hào)：R737.25學(xué)號(hào)：S080321貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2011屆碩士學(xué)位論文屆碩士學(xué)位論文人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因反義核酸結(jié)合位點(diǎn)的體外篩選保密期限：2011年6月～2012年6月研究生：嚴(yán)波導(dǎo)師：陳方敏教授石家齊教授年級(jí)：2008級(jí)專業(yè)：泌尿外科2011年5月20日人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因反義核酸結(jié)合位點(diǎn)的體外篩選2011屆泌尿外科碩士學(xué)位論文第1頁(yè)人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因反義核酸結(jié)合位點(diǎn)的

2、體外篩選專業(yè)：泌尿外科研究生：嚴(yán)波導(dǎo)師：陳方敏教授石家齊教授【摘要】目的目的利用隨機(jī)寡核苷酸文庫(kù)RNaseH切割法并結(jié)合計(jì)算機(jī)軟件預(yù)測(cè)篩選人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（humantelomerasereversetranasehTERT）基因的反義核酸結(jié)合位點(diǎn)。方法方法合成20mer隨機(jī)寡核苷酸文庫(kù)，與體外轉(zhuǎn)錄出的全長(zhǎng)hTERTcRNA雜交，RNaseH酶切割后，經(jīng)引物延伸、放射自顯影，篩選出26個(gè)針對(duì)hTERT基因的反義結(jié)合位點(diǎn)（antisens

3、eaccessiblesiteAAS）。結(jié)合RNAstructure軟件分析、選定具有顯著莖環(huán)結(jié)構(gòu)的7個(gè)位點(diǎn)作為最佳反義結(jié)合位點(diǎn)，分別合成其反義寡核苷酸（AntisenseOligonucleotideASODN），轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞PC3，運(yùn)用MTT比色法及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RTPCR）分別對(duì)前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及hTERTmRNA表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并與隨機(jī)寡核苷酸對(duì)照。結(jié)果結(jié)果hTERT基因7個(gè)最佳反義結(jié)合位點(diǎn)分別位于hTERTm

4、RNA690bp~709bp、752bp~771bp、982bp~1001bp、1094bp~1114bp、2284bp～2303bp、2490bp～2509bp、3311bp～3330bp。合成其互補(bǔ)性ASODN17轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞PC3后，細(xì)胞生長(zhǎng)受到明顯制抑，其中ASODN3的抑制作用最明顯(40.6%)，與對(duì)照組抑制率(9.7%)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.05），hTERTmRNA表達(dá)水平亦受到明顯抑制，也是以ASODN3的抑制作用最