廣西何首烏中蒽醌類化合物GXHSWAQ-1單體對(duì)鼻咽癌的放射增敏作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究廣西何首烏中蒽醌類化合物GXHSWAQ-1對(duì)鼻咽癌的放射增敏作用，并探討其體外放射增敏作用的機(jī)制。 方法：(1)采用MTT法檢測(cè)不同濃度GXHSWAQ-1對(duì)CNE-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，確定無細(xì)胞毒作用的藥物濃度。(2)通過克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察GXHSWAQ-1在無細(xì)胞毒作用的濃度下對(duì)乏氧CNE-1細(xì)胞的放射增敏作用。(3)通氮乏氧條件下，應(yīng)用RT-FQ PCR技術(shù)檢測(cè)放射增敏實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組CNE-1細(xì)胞中乏氧

2、相關(guān)基因、DNA損傷修復(fù)基因以及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。(4)采用FCM檢測(cè)放射增敏實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的細(xì)胞周期分布、凋亡效應(yīng)以及細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量。(5)通過皮下注射細(xì)胞懸液的方法構(gòu)建人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，腹腔注射高低兩個(gè)劑量的GXHSWAQ-1并聯(lián)合移植瘤局部放射干預(yù)，檢測(cè)裸鼠移植瘤瘤塊最大徑、計(jì)算絕對(duì)腫瘤生長(zhǎng)延緩時(shí)間(AGD)和標(biāo)準(zhǔn)化腫瘤生長(zhǎng)延緩時(shí)間(NGD)，求出增敏系數(shù)(EF); HE染色觀察瘤組織石蠟切片的病理學(xué)改變，計(jì)算核分裂率

3、。 結(jié)果：(1) GXHSWAQ-1對(duì)CNE-1細(xì)胞的增殖抑制作用較小，IC50為465μg/ml。GXHSWAQ-1在濃度低于62.5μg/ml時(shí)對(duì)CNE-1細(xì)胞無細(xì)胞毒作用(抑制率低于10％)。 (2)無細(xì)胞毒作用的濃度3.9μg/ml和7.8μg/ml的GXHSWAQ-1對(duì)乏氧CNE-1細(xì)胞具有放射增敏作用，增敏比分別為1.436和1.832，呈劑量依賴性。 (3)乏氧作用不同時(shí)間后細(xì)胞HIF-1αmRNA

4、表達(dá)都明顯升高(P<0.05)，而單獨(dú)GXHSWAQ-1組HIF-1α表達(dá)無明顯變化；與對(duì)照組比較單純放療能誘導(dǎo)KU70/80、Survivin和hTERT mRNA表達(dá)上調(diào)，放療聯(lián)合乏氧組對(duì)KU70/80、Survivin和hTERT的上調(diào)作用比單純放療組更明顯；而在乏氧情況下GXHSWAQ-1組聯(lián)合照射處理后與單純放療組比較KU70/80、Survivin和hTERT mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05)。 (4)GXHSW

5、AQ-1聯(lián)合照射組CNE-1細(xì)胞G0/G1期(％)比率為49.03±1.63，G2/M期(％)比率為14.27±0.57，與單純照射組的53.89±1.12、8.0±0.18，單純加藥組的72.19±3.736、5.81±0.15和對(duì)照組的66.13±4.02、3.57±0.77相比，差異顯著(P<0.05)，細(xì)胞G2/M期阻滯明顯。GXHSWAQ-1聯(lián)合照射組CNE-1細(xì)胞的凋亡率(％)為22.78±1.6，高于單純照射組19.92±

6、2.0、單純加藥組16.58±0.8和對(duì)照組17.79±1.3(P<0.05)。GXHSWAQ-1作用乏氧CNE-1細(xì)胞12h、24h后ROS的含量和對(duì)照組比較，相對(duì)比值分別為2.82±0.23、3.17±0.35，顯著高于單純乏氧組的相對(duì)比值0.47±0.13、0.71±0.08(P<0.05); GXHSWAQ-1聯(lián)合射線作用CNE-1細(xì)胞12h、24h后ROS的含量和對(duì)照組比較，相對(duì)比值為2.78±0.24、2.30±0.18，顯

7、著高于單純照射組的相對(duì)比值2.17±0.23、1.54±0.27(P<0.05)。 (5)移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果：各組瘤塊最大徑倍增時(shí)間(d)分別為：對(duì)照組17.02±1.1、溶媒組17.14±0.6、12mg/kg GXHSWAQ-1組17.2±0.8、4mg/kg GXHSWAQ-1組17.4±1.0、單純照射組21.3±1.14、12mg/kgGXHSWAQ-1聯(lián)合照射組24.1±0.7、4mg/kg GXHSWAQ-1聯(lián)合照射組

8、24.17±0.6。對(duì)照組、溶媒組和單純用藥組組間無顯著差異(P>0.05)；單純照射組腫瘤生長(zhǎng)受到一定程度的抑制，和對(duì)照組相比，腫瘤生長(zhǎng)延緩時(shí)間為4.28d，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);12mg/kg GXHSWAQ-1聯(lián)合照射組和4mg/kg GXHSWAQ-1聯(lián)合照射組的腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制，腫瘤生長(zhǎng)延緩時(shí)間分別為6.9d和6.77d，和對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。增敏系數(shù)(EF)分別為1.612和1.601。

9、對(duì)各組瘤塊切片HE染色結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明，單純照射組核分裂率為6.59±0.226(％)和對(duì)照組(6.08±0.8)比較沒有差異(P>0.05)，高低兩個(gè)劑量增敏組的核分裂率分別為3.80±0.455和3.43±0.34，與對(duì)照組比較，明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論：1、無細(xì)胞毒作用濃度的GXHSWAQ-1對(duì)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞具有放射增敏作用，增敏機(jī)理可能與其抑制乏氧狀態(tài)下亞致死性損傷修復(fù)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，引起G2+M