乙肝相關性肝病患者外周血SOCS1、SOCS3表達及其臨床意義.pdf

1、一、研究背景： 慢性乙型肝炎感染嚴重影響全球人類的健康，全球超過20億人口感染HBV，4億人為慢性感染者，在亞太地區(qū)更為重要，75％感染者在亞洲，中國和印度占50％，我國每年有約30萬人死于HBV感染導致的肝衰竭、肝硬化、肝癌。 慢性乙型肝炎的發(fā)展受病毒復制狀態(tài)和機體免疫應答兩個主要因素的影響。近年研究顯示，宿主免疫應答中，細胞因子信號傳導抑制因子(Suppressor of cytokine signaling) SO

2、CS1、SOCS3通過抑制細胞因子信號轉導調節(jié)機體對細胞因子的過度刺激，可能與肝病的發(fā)生發(fā)展有關。 二、研究目的： 本課題通過熒光定量PCR的方法檢測HBV相關性肝病外周血中SOCS1、SOCS3mRNA的表達情況，對SOCS1與SOCS3與HBV相關性肝病的臨床意義進行了初步分析。為進一步研究與治療(如未來細胞因子的治療等)提供依據。 三、材料和方法： 3.1研究對象 選取2008年9月—20

3、09年3月中山大學附屬第三醫(yī)院感染科門診及住院患者，診斷符合2006年中華醫(yī)學會感染病學分會和中華醫(yī)學會肝病學分會制定我國第一部《肝衰竭診療指南》及2000年西安《病毒性肝炎防治方案》，并排除了合并甲、丙、丁、戊型肝炎、肝細胞肝癌、酒精性肝病、藥物性肝病、自身免疫性肝病；伴有冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、動脈硬化癥等心腦血管疾病；資料不完整者。根據入院時是否使用核苷類抗病毒藥物，分為抗病毒組(至少2周以上)和綜合治療組。 3.2實驗

4、方法 (1)臨床資料收集：年齡、性別、以患者住院3天內化驗數據為計算指標，包括ALT、AST、總膽紅素(TBIL)(umol/L)、肌酐(CREAT)(umol/L)、凝血酶原時間國際標準化比值(INR)，乙型肝炎病毒標記物：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗體(HBeAb)、乙型肝炎C抗體(HBcAb)、乙肝病毒去氧核糖核酸的定量檢測(HBV—DNA)、是

5、否服用核苷類抗病毒藥物及使用的種類、時間長短。 (2)設計SOCS1、SOCS3及內參β actin上、下游引物，收集肝素抗凝血3ml，用紅細胞裂解液分離外周血單個核細胞，TRIZOL提取總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)為引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA，采用半定量RT—PCR法檢測外周血單個核細胞中SOCS1、SOCS3mRNA表達。 (3)數據分析采用2-△△Ct法，Ct值的定義：PCR擴增

6、過程中，擴增產物的熒光信號達到設定的閾值時所經過的擴增循環(huán)次數．計算公式：F=2-[待測組目的基因平均Ct值—待測組管家基因平均C±值]—[對照組目的基因平均Ct值—對照組管家基因平均Ct值] 3.3統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件進行統計，兩組均數比較采用t檢驗，等級相關資料使用Spearman非參數相關分析，檢驗水準是0.05。 四、結果： 4.1一般資料 本研究90例乙肝患者，正常對

7、照組10例，男性7例，女性3例，最小24歲，最大40歲，平均年齡28.2歲。 表1 HBV相關性肝病基礎資料 4.2乙肝相關性肝病外周血單個核細胞中SOCS1和SOCS3表達 正常組、肝衰竭組、肝硬化組、慢性肝炎組外周血單個核細胞中均可見SOCS1、SOCS3mRNA表達，對肝衰竭組、肝硬化組、慢性肝炎組和正常組進行兩兩比較，結果顯示各組SOCS1mRNA在外周血中表達水平不同，但差異無統計學意義(P值均>0.0

8、5)。 SOCS3mRNA在肝衰竭組外周血單個核細胞中的表達明顯高于正常組，是正常組的4.39倍，P值=0.012(<0.05)，差異有統計學意義；肝硬化組SOCS3mRNA表達高于正常組，P值=0.001(<0.01)，是正常組的3.9倍，慢性肝炎組SOCS3表達與正成組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。 4.3外周血中SOCS1、SOCS3 mRNA表達與抗病毒治療、HBeAg、乙肝病毒復制狀態(tài)的關系

9、 4.3.1 SOCS1、SOCS3 mRNA表達與抗病毒治療的關系 根據是否有2周以上核苷類抗病毒藥物治療史，將肝衰竭組、肝硬化組患者分為抗病毒組及綜合治療組，采用T檢驗法，分析各組SOCS1、SOCS3表達與抗病毒治療的關系。 結果顯示：肝衰竭、肝硬化抗病毒組和綜合治療組外周血中SOCS1、SOCS3mRNA表達差異無統計學意義(P值>0.05)。 4.3.2 SOCS1、SOCS3 mRNA表達與HBeAg

10、關系 肝衰竭、慢性肝炎HBeAg陽性組、陰性組SOCS1、SOCS3在外周血單個核細胞中的表達無差異(P>0.05) 肝硬化HBeAg陽性組SOCS1mRNA表達高于陰性組，P值=0.021(<0.05)，差異有統計學意義，SOCS3表達差異無統計學意義。 4.3.3 SOCS1、SOCS3 mRNA表達與HBV—DNA定量關系 慢性肝炎外周血中SOCS1因子表達水平與血HBV DNA定量表達水平之間存在

11、負相關，差異有統計學意義(rs=-0.555，p=0.017<0.05)。SOCS3與血HBVDNA定量表達水平之間無相關性。 肝衰竭、肝硬化外周血中SOCS1、SOCS3表達水平與血清HBV DNA定量之間無相關性(p>0.05)。 4.4外周血單個核細胞中SOCS1和SOCS3表達水平與病情輕重的關系 采用Spearman非參數相關分析，對各組外周血單個核細胞中SOCS1、SOCS3mRNA表達水平與肝功生化

12、指標(PT、PTA、ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL)及MELD評分之間的相關關系進行分析。 4.4.1乙肝慢加急肝衰竭患者 結果顯示，SOCS1、SOCS3mRNA表達水平與肝功生化指標、MELD評分無相關性(P>0.05)。 4.4.2乙肝肝硬化患者 肝硬化外周血單個核細胞中SOCS1和SOCS3表達水平顯著相關，(rs=0.524，P=0.003，P<0.01)。SOCS1表達水平與乙肝肝

13、硬化臨床生化指標PT負相關，(rs=—0.515，P=0.004，P<0.01)，與PTA正相關(rs=0.509，P=0.004，P<0.01)。SOCS1表達水平與其它肝功生化指標(ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL)及MELD評分之間無相關性。SOCS3mRNA表達與肝功生化指標(PT、PTA、ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL)及MELD評分之間無顯著性相關。 4.4.3慢性乙型肝炎患者 SOC

14、S1表達水平與慢性肝炎臨床生化指標AST負相關，(rs=—0.533，P值為0.019，P<0.05)，但與ALT、ALB、TBIL、DBIL、PT、PTA、MELD評分無顯著性相關(P>0.05)。SOCS3表達水平與慢性乙型肝炎臨床生化指標ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL、PT、PTA、MELD評分均無明顯相關，(P>0.05)。 4.5外周血中SOCS1和SOCS3表達水平之間的關系 肝衰竭外周血單個核細

15、胞中SOCS1和SOCS3表達水平顯著正相關，(rs=0.737，P值為0.000，P<0.01)。 肝硬化外周血單個核細胞中SOCS1和SOCS3表達水平顯著正相關，(rs=0.57，P值為0.011，P<0.05)。 慢性肝炎外周血單個核細胞中SOCS1和SOCS3表達水平無相關(P>0.05)。 五、結論： 1.乙肝肝衰竭、肝硬化患者外周血單個核細胞中SOCS3mRNA表達增高，肝硬化組SOCS1m