SOCS3在細(xì)胞模型及難治性慢性乙肝患者PBMC中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：最近研究顯示,細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)是一種IFN信號分子的調(diào)節(jié)因子,參與機(jī)體的免疫反應(yīng)過程,影響IFN抗病毒療效。本研究擬探討SOCS3在HBV復(fù)制的細(xì)胞模型和難治性慢性乙肝患者中的表達(dá)及意義。
　　方法：選用本實驗室保存的HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞兩種細(xì)胞系。HepG2為人肝癌細(xì)胞系,HepG2.2.15細(xì)胞是有HBV復(fù)制的Hep

2、G2細(xì)胞,可作為HBV復(fù)制感染模型。選用普通干擾素IFNα-2a(商品名因特芬)作為刺激因子,收集干擾素(IFN)刺激前的兩種細(xì)胞及干擾素刺激6小時、12小時、24小時、48小時、72小時的兩種細(xì)胞,用RealTime-PCR方法和Western-Blot方法分別從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測細(xì)胞中SOCS3的表達(dá);本實驗中難治性慢性乙肝患者指的是先前已使用抗病毒藥物恩替卡韋治療9-36個月HBeAg陽性的慢性乙肝患者,經(jīng)過恩替卡韋治療后HB

3、VDNA已轉(zhuǎn)陰但尚未發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換,且HBeAg<1000PEIU/ml。符合條件的患者再按照隨機(jī)分組的原則分為A、B兩個組。其中A組患者將聯(lián)合使用長效干擾素和恩替卡韋8周,后單用長效干擾素PEG-IFNα-2a繼續(xù)治療至一年后停藥,B組繼續(xù)使用恩替卡韋治療。我們從A、B兩組中分別選取20名患者,在基線、4周、12周、24周采集外周血并提取PBMC。然后提取PBMC中的RNA和蛋白,用RealTime-PCR和Western-

4、Blot方法研究SOCS3的表達(dá)。
　　結(jié)果：Real-timePCR和Western-Blot結(jié)果顯示,在未使用干擾素時(即基線水平),HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞均有SOCS3的表達(dá),且HepG2.2.15細(xì)胞中SOCS3的基線表達(dá)高于HepG2細(xì)胞(p<0.05);HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞在干擾素刺激后(6小時、12小時、24小時)SOCS3的表達(dá)量是增高的,其中以刺激后6小時的SOCS3表達(dá)量最

5、高,且有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。在干擾素刺激后,相同時間點(6,12,24小時)HepG2.2.15細(xì)胞中SOCS3的表達(dá)均高于HepG2細(xì)胞(6小時,12小時有統(tǒng)計學(xué)差異p<0.05)。在參與本藥物試驗的難治性慢性乙肝患者PBMC中,接受干擾素治療的A組患者,治療后不同階段SOCS3在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)與治療前相比較均有增高(p<0.05),SOCS3在蛋白水平的表達(dá)也較治療前增高;而在使用恩替卡韋的B組患者的PBMC中,SOCS3的