PBEF多抗的制備及在小鼠肺結(jié)核模型中的應(yīng)用研究.pdf

1、前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子(Pre-B-cell colony-enhancing factor,PBEF)是近來在內(nèi)臟脂肪組織中發(fā)現(xiàn)的一類高表達(dá)的細(xì)胞因子,也被命名為內(nèi)臟脂肪素(Visfatin)。PBEF廣泛的分布在各種內(nèi)臟組織中,尤其在肝臟、肺、心臟、腦、腎臟、脂肪、胎膜等組織中高度表達(dá)并發(fā)揮著重要的作用。
　　 研究認(rèn)為機(jī)械應(yīng)力與炎癥損傷被認(rèn)為是急性肺損傷的病理基礎(chǔ),能增加肺部的通透性和易感性,通過上調(diào)PBEF蛋白質(zhì)的表達(dá),導(dǎo)

2、致PBEF的表達(dá)升高,影響凝血酶誘導(dǎo)減少人肺血管內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能,增加細(xì)胞骨架重排,促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子IL-8等的分泌;同時(shí),也有研究顯示,PBEF在犬、鼠等動(dòng)物模型以及人急性肺損傷的肺組織中高表達(dá),并且在支氣管肺泡灌洗液和血清中有顯著的增加,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PBEF可能是急性肺損傷的一種新的診斷標(biāo)識(shí)。
　　 國內(nèi)外的研究資料顯示:PBEF作為一種內(nèi)源性炎癥因子[11,12]介導(dǎo)細(xì)胞免疫,其在肺結(jié)核發(fā)病機(jī)理中的作用不容忽視。PBEF在

3、慢性炎癥性疾病的發(fā)病機(jī)制中具有重要的作用。肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌(MTB)感染的,導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降的一種慢性呼吸道傳染病,細(xì)胞免疫和相關(guān)免疫因子的作用是結(jié)核病發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。目前國內(nèi)外關(guān)于PBEF在動(dòng)物肺結(jié)核模型中的作用研究尚未見報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建原核表達(dá)載體PET28a-PBEF;將重組載體PET28a-PBEF轉(zhuǎn)化到大腸桿菌E.coliBL-21表達(dá)菌株中,以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)PBEF目的蛋

4、白,對(duì)所得的樣品進(jìn)行SOS-PAGE電泳;再利用Ni2+親合柱對(duì)PBEF目的蛋白進(jìn)行純化;將純化后的目的蛋白作為抗原免疫家兔制備多克隆抗體;ELISA法檢測(cè)兔抗PBEF血清的效價(jià),Westernblot檢測(cè)到抗體特異性:以制備的PBEF多克隆抗體為工具,檢測(cè)小鼠肺結(jié)核模型肺組織中PBEF基因和總蛋白的表達(dá)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),在52KD位置有PBEF目的蛋白的條帶顯示,并且是以包涵體形式表