川芎嗪對(duì)大鼠失神經(jīng)骨骼肌細(xì)胞凋亡及bc1-2、bax表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討川芎嗪對(duì)失神經(jīng)骨骼肌細(xì)胞凋亡及bcl-2、bax表達(dá)的影響，尋找延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮的新途徑。
　　 方法：將54只SPF級(jí)健康的Wistar大鼠,3-4周齡，體質(zhì)量(200±10)g，雌雄不拘，隨機(jī)分為9組，分別為正常對(duì)照組(A)、失神經(jīng)對(duì)照組(B、C、D、E)、川芎嗪干預(yù)組(F、G、H、I)。行腹腔內(nèi)注射10％水合氯醛(2ml/kg)麻醉，暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)，正常對(duì)照組(0d)僅暴露并不切斷坐骨神經(jīng)；失神經(jīng)對(duì)照組、川

2、芎嗪干預(yù)組于坐骨神經(jīng)中段切取大于10mm，近端翻轉(zhuǎn)180°，將其與鄰近組織縫合，建立動(dòng)物模型。術(shù)后干預(yù)：川芎嗪干預(yù)組于腹腔注射川芎嗪注射液80mg/(kg·d);失神經(jīng)對(duì)照組腹腔注射等劑量生理鹽水。在術(shù)后第O、2、7、14、28天分別取一組大鼠稱重后處死，取右側(cè)腓腸肌并稱肌濕重，置于-80℃冰箱保存，備用。采用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)各時(shí)段bcl-2以及bax mRNA和蛋白表達(dá)水平。使用TUNEL法檢測(cè)肌細(xì)胞凋亡。用

3、統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果：本研究證實(shí)大鼠腓腸肌失神經(jīng)支配后肌濕質(zhì)量比下降，到28d時(shí)約為對(duì)照組的32％。川芎嗪干預(yù)組2d時(shí)對(duì)肌濕質(zhì)量比無(wú)明顯影響(P＞0.05)；術(shù)后7d、14d、28d川芎嗪干預(yù)組與正常對(duì)照組比較，肌濕質(zhì)量比雖然減少（28d時(shí)約為正常對(duì)照組的64％），但均顯著高于同期失神經(jīng)對(duì)照組(P＜0.05)。大鼠腓腸肌失神經(jīng)支配后bcl-2mRNA在各時(shí)間點(diǎn)持續(xù)降低，而bax mRNA持續(xù)增高，

4、但均高于正常對(duì)照組。與失神經(jīng)對(duì)照組比較，bcl-2 mRNA的表達(dá)相對(duì)量雖然降低，但均高于同期失神經(jīng)對(duì)照組(P＜0.05)；相反的，與失神經(jīng)對(duì)照組比較，川芎嗪干預(yù)組bax mRNA雖然增高，但均低于同期失神經(jīng)對(duì)照組(P＜0.05)。大鼠腓腸肌失神經(jīng)支配后bcl-2的蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)持續(xù)降低，而bax的蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)逐漸增高，但均高于正常對(duì)照組。與失神經(jīng)對(duì)照組比較，川芎嗪干預(yù)組bcl-2的蛋白表達(dá)雖然降低，但均高于同期失神經(jīng)對(duì)照組(

5、P＜0.05)；而bax的蛋白表達(dá)雖然增高，但均低于同期失神經(jīng)對(duì)照組(P＜0.05)。失神經(jīng)組凋亡率逐漸升高，且與正常對(duì)照組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，采用川芎嗪治療2d時(shí)，細(xì)胞凋亡率顯著低于同期失神經(jīng)對(duì)照組(P＜0.05)，此后隨著失神經(jīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，其表達(dá)水平雖然呈增高趨勢(shì)，但卻始終低于同期失神經(jīng)對(duì)照組的表達(dá)水平(P＜0.05)。關(guān)聯(lián)性分析顯示，在失神經(jīng)組中bax的表達(dá)與肌濕質(zhì)量比呈負(fù)性相關(guān)關(guān)系(r=-0.776，P＜0.

6、05)，而與細(xì)胞凋亡率呈正性相關(guān)關(guān)系(r=0.811，P＜0.05)；失神經(jīng)組中bcl-2的表達(dá)與肌濕質(zhì)量比呈正性相關(guān)關(guān)系(r=0.829，P＜0.05)，而與細(xì)胞凋亡率呈負(fù)性相關(guān)關(guān)系(r=-0.790，P＜0.05)，表明bcl-2以及bax的表達(dá)與肌細(xì)胞凋亡率、肌濕質(zhì)量比有關(guān)；且bax與bcl-2的表達(dá)呈線性負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.821，P＜0.05），表明失神經(jīng)支配腓腸肌萎縮與bcl-2的表達(dá)減少和bax表達(dá)的增加有關(guān)。