熟地、肉蓯蓉超濾膜提取物對氯化鎘誘導(dǎo)BMSCs微核率、染色體畸變率及凋亡的影響.pdf

1、目的：通過應(yīng)用不同濃度的氯化鎘（cadmium chloride，CdCl2）孵育小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs），觀察細(xì)胞形態(tài)及增殖情況，篩選出CdCl2抑制BMSCs生長的最佳濃度及時(shí)間；應(yīng)用補(bǔ)益中藥熟地（rehmannia glutinosa）及肉蓯蓉（desertliving cistanche）超濾膜提取物作用于CdCl2誘導(dǎo)的BMSCs，探討熟地及肉蓯蓉

2、對BMSCs的遺傳穩(wěn)定性及凋亡的作用，為中藥聯(lián)合BMSCs的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：用含有50umol/L、100 umol/L、200 umol/L、400 umol/L、800 umol/L CdCl2的DMEM-F12培養(yǎng)液作用于密度為1×104個(gè)/mL的小鼠BMSCs24 h、48 h、72 h，通過倒置相差顯微鏡觀察不同濃度 CdCl2誘導(dǎo)小鼠BMSCs的細(xì)胞形態(tài)，用MTT法檢測CdCl2抑制小鼠BMSCs細(xì)胞

3、的增殖情況，篩選出最佳作用濃度及時(shí)間,同時(shí)設(shè)正常BMSCs對照組。用水提法結(jié)合超濾法制備熟地、肉蓯蓉不同分子量段提取物：分子量10,000以下、10,000-100,000及100,000-200,000三部分；將實(shí)驗(yàn)一篩選所得最佳CdCl2濃度作用于BMSCs，隨機(jī)分為CdCl2誘導(dǎo)的BMSCs染毒模型組，熟地、肉蓯蓉各段提取物干預(yù)組，作用24h，通過微核實(shí)驗(yàn)、染色體分析及流式細(xì)胞儀分別觀察CdCl2對BMSCs細(xì)胞微核率、染色體畸變

4、率及細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示濃度50-800 umol/L的CdCl2可對BMSCs有明顯的抑制作用，通過改良寇氏法計(jì)算IC50確定出CdCl2對BMSCs抑制作用最佳的濃度為400 umol/L，最佳作用時(shí)間為24h。顯微鏡下觀察，對照組細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣貼壁生長，胞體透亮，折光性強(qiáng)；CdCl2誘導(dǎo)組細(xì)胞呈凸起回縮，細(xì)胞變小、變圓，貼壁不牢，懸浮細(xì)胞增多。通過微核實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞微核數(shù)及計(jì)算細(xì)胞微核率發(fā)現(xiàn)，與對照組比

5、較，分子量10,000以下、10,000-100,000、100,000-200,000的熟地及肉蓯蓉超濾膜提取物均可以減小CdCl2誘導(dǎo)的BMSCs微核數(shù)及微核率，均以分子量10,000以下提取物效果最為明顯（p<0.05）；與不加中藥有效成分的對照組相比差異均具顯著性（p<0.05）。通過染色體分析觀察細(xì)胞染色體畸變率發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，分子量10,000以下、10,000-100,000、100,000-200,000的熟地及肉蓯

6、蓉超濾膜提取物均可以減小 CdCl2誘導(dǎo)的BMSCs染色體畸變率的發(fā)生，均以分子量10,000以下提取物效果最為明顯（p<0.05）；與不加中藥有效成分的對照組相比差異均具顯著性（p<0.05）。通過流式細(xì)胞術(shù)測試細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，分子量10,000以下、10,000-100,000、100,000-200,000的熟地及肉蓯蓉超濾膜提取物組均可以降低CdCl2誘導(dǎo)的BMSCs的凋亡率，其中在各組肉蓯蓉超濾膜提取物中以分子量1