肉蓯蓉酶解提取物對HKC細(xì)胞及慢性腎衰竭大鼠的影響研究.pdf

1、目的：酶解輔助肉蓯蓉提取前期結(jié)果表明，該方法可以顯著提高肉蓯蓉中苯乙醇苷及多糖的傳質(zhì)，因此，在此基礎(chǔ)上研究肉蓯蓉的酶解提取物對HKC細(xì)胞及慢性腎衰竭大鼠的影響，以便為肉蓯蓉酶解輔助提取提供理論依據(jù)。
　　方法：肉蓯蓉酶解提取部分，通過對單因素考察以及工藝參數(shù)優(yōu)選等實驗來確定肉蓯蓉酶解提取的最佳工藝參數(shù)。細(xì)胞實驗部分，對人正常胚腎上皮細(xì)胞株HKC細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),采用細(xì)胞增殖毒性實驗探討HKC細(xì)胞經(jīng)阿霉素（Doxourbicin）損

2、傷后，不同濃度肉蓯蓉酶提液的正丁醇萃取物分別在24 h、48 h、72 h對其存活率的影響。采用Hoechst33258染色法觀察HKC經(jīng)阿霉素?fù)p傷后,用不同濃度肉蓯蓉酶提液的正丁醇萃取物處理24 h后HKC細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測不同濃度肉蓯蓉酶提液的正丁醇萃取物作用24 h后對經(jīng)阿霉素?fù)p傷的HKC細(xì)胞周期分布的影響。動物實驗部分，大鼠通過腺嘌呤灌胃給藥造慢性腎衰竭動物模型，造模成功后的大鼠分組給予相應(yīng)的治療藥物，治療2

3、8天后，對大鼠進(jìn)行血清生化指標(biāo)檢測和血常規(guī)檢測，并觀察大鼠一般情況和腎臟組織改變。
　　結(jié)果：肉蓯蓉酶解輔助提取部分，實驗最終確定的肉蓯蓉酶解提取的最佳工藝參數(shù)為料液比1:8，酶解溫度55℃，酶解時間2.5 h，纖維素酶的用量0.1％，肉蓯蓉酶解輔助提取比傳統(tǒng)水提法苯乙醇苷含量增加了64%。細(xì)胞實驗部分，MTT結(jié)果表明，不同濃度肉蓯蓉酶提液的正丁醇萃取物均對阿霉素?fù)p傷后的HKC細(xì)胞有明顯的增殖作用，即細(xì)胞的存活率升高，并且作用強度

4、與藥物的濃度有明顯的依賴性關(guān)系。染色結(jié)果表明，不同濃度肉蓯蓉酶提液的正丁醇萃取物處理阿霉素?fù)p傷的HKC細(xì)胞24 h后，細(xì)胞凋現(xiàn)象亡明顯減少，細(xì)胞形態(tài)趨于正常細(xì)胞，且與藥物濃度有明顯的依賴性。流式細(xì)胞技術(shù)測細(xì)胞周期結(jié)果表明，肉蓯蓉酶提液的正丁醇萃取物影響阿霉素?fù)p傷后的HKC細(xì)胞周期的分布,隨著肉蓯蓉酶提液的正丁醇萃取物濃度的增加，G0/G1期細(xì)胞百分比逐漸升高，而G2/M期百分比逐漸降低，且細(xì)胞凋亡明顯減少。動物實驗部分，與模型對照組相比

5、，肉蓯蓉煎劑治療組和正丁醇萃取治療組的大鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平明顯降低，白蛋白（ALB）水平明顯升高，紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、細(xì)胞壓積(HCT)水平明顯升高，大鼠腎臟指數(shù)減小，病理檢查出現(xiàn)明顯異常，水層治療組基本沒有變化。
　　結(jié)論：酶解提取能夠顯著的提高肉蓯蓉中有效成分苯乙醇苷的傳質(zhì)，而通過細(xì)胞實驗和動物實驗，說明肉蓯蓉對慢性腎衰衰竭有一定的治療作用，且其起主要治療作用的是正丁醇萃取的有效部位