間隙性應(yīng)用甲狀旁腺激素（PTH）對大鼠成骨細胞蛋白譜的影響.pdf

1、目的：間隙性PTH應(yīng)用于大鼠和人都可以促進骨形成，但是其作用機理尚未明確。本研究試圖通過蛋白質(zhì)組學(xué)方法來比較間隙性PTH刺激組大鼠成骨細胞與對照組大鼠成骨細胞的蛋白質(zhì)表達譜，初步探討間隙性PTH應(yīng)用促成骨的可能機制。 方法：在每個為期24小時的細胞培養(yǎng)周期中，大鼠成骨細胞(ROB)與PTH在前6小時共孵育，后18小時與PTH溶劑共孵育(PTH間隙刺激組)；或整個周期中僅與PTH溶劑共孵育(對照組)。在第3周期的第6小時末(PTH

2、間隙刺激組稱Itm6h，對照組稱Ctr6h)、24小時末(PTH間隙刺激組為Itm24h，對照組為Ctr24h)分別收集細胞，裂解液溶解細胞蛋白。利用雙向電泳方法分離細胞蛋白質(zhì)，并用ImageMaster圖像分析軟件比較這二組細胞的蛋白質(zhì)圖譜，隨機選擇一些差異蛋白質(zhì)點，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸離子化-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測定其膠內(nèi)酶解后的肽質(zhì)量指紋圖譜，通過Mascot軟件查詢Swiss-prot數(shù)據(jù)庫。 結(jié)果：

3、我們獲得了重復(fù)性好的成骨細胞蛋白質(zhì)圖譜。分析蛋白質(zhì)圖譜發(fā)現(xiàn)Itm6h較Ctr6h有7種蛋白表達下調(diào)，選取其中5個蛋白質(zhì)斑點，鑒定結(jié)果為：F-actincappingbetasubunit，phenylalanine-tRNAsynthetase-likesubunit，Ppprotein，IL-22R-alpha-2以及一個未知功能蛋白；Itm24h較Ctr24h有14種蛋白表達上調(diào)，有5種蛋白表達下調(diào)，選取其中14個蛋白質(zhì)斑點，經(jīng)鑒定

4、得知在Itm24h中表達上調(diào)的蛋白質(zhì)分別是：beta-actin，Vimentin，GRP78，GrpE-like1，GrpEproteinhomolog1，PDIprecursor,ERP29precursor,GDIalpha，proteinDJ-1，Galactokinase1，IGFBP-3precursor以及一個未知功能蛋白。這些差異表達的蛋白中大多數(shù)具有直接或間接調(diào)節(jié)某些細胞凋亡的功能。 結(jié)論：PTH間隙性刺激體外