野豬、野家雜交豬及家豬LPL基因表達規(guī)律及定量比較研究.pdf

1、本研究采用半定量RT-PCR方法研究了LPL在3、6、9、12月齡大白豬、野家雜交豬和12月齡野豬的心、肝、脾、肺、腎、胃、大腸、小腸、背肌和腿肌等10個組織中mRNA水平上的表達規(guī)律；采用競爭性RT-PCR方法檢測了3、6、9、12月齡大白豬、野家雜交豬和12月齡野豬背肌中LPLmRNA的表達規(guī)律和表達量。主要研究結(jié)果如下： 1.LPL基因在所檢測的大白豬、野家雜交豬和野豬的10個組織中均有表達，且在心肌中表達水平始終較高，在

2、肝和肺中表達水平始終較低。在脾、腎、胃、大腸、小腸和肌肉中LPL的表達存在空間和組縱間的特異性。12月齡背肌中LPL基因表達量大白豬最高、野家雜交豬次之，野豬最低。 2.LPL基因在心臟各生長發(fā)育階段的表達水平野家雜交豬均高于大白豬；在肝、脾、腎、大腸、背肌和腿肌中的表達規(guī)律大白豬與野家雜交豬之間存在著表達曲線類型、表達高峰所處的生長階段和表達強度上的差異。在大白豬和野家雜交豬背肌生長發(fā)育過程中LPL表達曲線類型不同，雖然表達最

3、的變化總體上都呈上升趨勢，但大白豬背肌LPL的表達高峰處于12月齡，而野家雜交豬背肌LPL的表達高峰處于6月齡，且在3月齡和6月齡野家雜交豬背肌中LPLmRNA的濃度分別是大白豬的3倍和2倍，比大白豬的大4.98E-4μg/ml和7.88E-4μg/ml；9月齡和12月齡大白豬背肌中LPLmRNA的濃度比野家雜交豬的分別大3.42E-4ug/ml和1.48E-4μg/ml。野家雜交豬和大白豬的LPL表達差異說明野家雜交豬的發(fā)育周期和大白

4、豬不一致，同時量的差異表明大白豬的脂肪沉積程度更高。 3.本實驗通過構(gòu)建同源性競爭模板進行競爭性RT-PCR反應(yīng)定量檢測了豬背肌中LPLmRNA的濃度，在3、6、9、12月齡的大白豬背肌中的濃度分別為2.06E-4μg/ml、6.02E-4μg/ml、1.21E-3μg/ml、1.08E-31μg/ml；在3、6、9、12月齡的野家雜交豬背肌中的濃度分別為7.02E-4μg/ml、1.39E-3μg/ml、8.68E-4μg/m

5、l、9.32E-4μg/ml：在12月齡的野豬背肌中的濃度為9.10E-4μg/ml。競爭性RT-PCR實驗中所設(shè)計的定量檢測引物在對LPLmRNA進行定量時僅需33個循環(huán)的PCR反應(yīng)即可計算結(jié)果，且所得濃度值精確到ps/ml，競爭性RT-PCR是一種不依賴于實時熒光定量PCR儀的經(jīng)濟、快捷、精確的定量方法。研究中采用半定量RT-PCR法檢測的LPL基因在大白豬和野家雜交豬背肌中的表達規(guī)律與競爭性RT-PCR法的檢測結(jié)果基本一致，符合脂