蟲草多糖對(duì)單側(cè)輸尿管梗阻小鼠腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化是各種腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎病的共同途徑和主要病理基礎(chǔ)，rIF程度與腎臟疾病預(yù)后密切相關(guān)，TIF程度越重，腎臟疾病預(yù)后越差。近年發(fā)現(xiàn)在慢性腎臟疾病的進(jìn)展中，腎小管上皮細(xì)胞不僅是被動(dòng)的受害者，而且是主動(dòng)的參與者，越來越多研究提示EMT是。rIF形成的重要環(huán)節(jié)。抑制甚至逆轉(zhuǎn)EMT‘可能會(huì)給TIF的治療帶來革命性的突破。蟲草多糖是傳統(tǒng)中藥冬蟲夏草的主要成分，可以調(diào)節(jié)免疫功能、降低血糖、抗腫瘤、保護(hù)’腎臟。多年臨床經(jīng)驗(yàn)表明，慢

2、性腎臟病患者長(zhǎng)期服用冬蟲夏草可降低蛋白尿、延緩慢性。腎病進(jìn)展。但是其具體作用機(jī)制至今尚未完全明確。近年研究顯示，蟲草對(duì)組織纖維化尤其對(duì)肝臟纖維化有明顯的抑制作用。目前，關(guān)于蟲草多糖對(duì)‘腎臟纖維化的研究少見報(bào)道，本研究主要目的是觀察蟲草多糖對(duì)UUO小鼠腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響，并探討其可能的相關(guān)機(jī)制。 方法：選用雄性CD-1小鼠，我們采用經(jīng)典的單側(cè)輸尿管梗阻模型。實(shí)驗(yàn)分組：1)對(duì)照組(N=8)；2)手術(shù)組(N=10)；3)蟲草多

3、糖治療組(N=10)。給予小鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料自由進(jìn)食及飲水，每天記錄體重。手術(shù)組和治療組小鼠均打開腹腔，分離左側(cè)輸尿管，雙線結(jié)扎后離斷。對(duì)照組小鼠只打開腹腔但不結(jié)扎輸尿管。治療組在術(shù)前2天開始給予蟲草多糖溶于蒸餾水，160 mg/kg灌胃。術(shù)后7天處死小鼠。小鼠取腹腔動(dòng)脈血，取左側(cè)部分腎組織于10﹪中性福爾馬林固定，石蠟包埋；其余腎組織于液氮冷凍，-80℃保存。測(cè)定小鼠的血肌酐值。光鏡下觀察各組小鼠腎臟間質(zhì)纖維化程度。免疫組化觀察各組腎臟α-

4、SMA、E-cadherin、CTGF、ILK、的表達(dá)分布變化。用Western blot方法定量檢測(cè)各組腎臟ILK和CTGF蛋白表達(dá)量變化。用real time PCR技術(shù)觀察各組腎臟α-SMA、E-cadherin、CTGF、ILK mRNA水平的變化。 結(jié)果：手術(shù)7天后，各組小鼠血肌酐無顯著差異，但手術(shù)組小鼠患側(cè)腎臟比對(duì)側(cè)體積增大，顏色蒼白，提示UUO模型建立成功。研究發(fā)現(xiàn)，手術(shù)組小鼠間質(zhì)纖維化程度較對(duì)照組加重(19.39

5、±1.52﹪vs．2.00±0.34﹪，P<0.01)，而蟲草多糖可以顯著減輕腎間質(zhì)纖維化(11.25±1.07﹪vs．19.39±1.52﹪，P<0.01)。免疫組化結(jié)果顯示，手術(shù)組小鼠’腎小管上皮E-cadherin蛋白表達(dá)較對(duì)照組顯著減少，而腎小管及間質(zhì)區(qū)α-SMA蛋白的表達(dá)比對(duì)照組顯著增加(P均<0.01)。治療組小鼠腎小管上皮E-cadherrin表達(dá)比手術(shù)組明顯增多，但仍明顯低于對(duì)照組(P均<0.01)。治療組α-SMA蛋白

6、的表達(dá)較手術(shù)組顯著降低，但高于對(duì)照組(P均<0.01)。Real time PCR的結(jié)果顯示，手術(shù)組小鼠α-SMA mRNA的表達(dá)較對(duì)照組顯著增多，治療組小鼠α-SMA mRNA的表達(dá)比手術(shù)組明顯減少(P均<0.01)。手術(shù)組小鼠E-cadherin mRNA的表達(dá)較對(duì)照組顯著降低，而治療組E-cadherin mRNA的表達(dá)較手術(shù)組明顯增多(P均<0.01)。研究中我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組小鼠腎小管僅有少量CTGF、ILK表達(dá)分布，而手術(shù)組小

7、鼠腎小管CTGF及ILK蛋白及mRNA的表達(dá)顯著升高。蟲草多糖治療后，小鼠腎小管CTGF、ILK蛋白及mRNA的表達(dá)都明顯低于手術(shù)組(P均<0.01)。 結(jié)論： 1、 UUO小鼠早期腎小管上皮細(xì)胞E-cadherin表達(dá)減少，α-SMA表達(dá)增多，提示。腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生了EMT。 2、UUO小鼠CTGF、ILK的表達(dá)增多，可能介導(dǎo)了EMT的形成。 3、蟲草多糖可顯著抑制CTGF、ILK的表達(dá)，并抑制E-c