曲尼斯特對糖尿病腎病腎小管上皮—間充質細胞轉分化的影響.pdf

1、目的:前期研究證實曲尼斯特能降低糖尿病腎病(DN)大鼠模型腎組織細胞外基質(FN和Col-1)的表達，抑制腎間質纖維化。本課題擬通過構建DN模型，觀察DN早期上皮細胞向間充質細胞轉分化(EMT)相關指標上皮細胞E-鈣粘素(E-cadherin)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達情況，應用曲尼斯特進行干預，研究曲尼斯特對DN早期EMT的影響，探討曲尼斯特抗DN腎間質纖維化的作用機理，為臨床使用曲尼斯特治療DN，驗證其延緩其腎功能進展

2、的作用。
　　方法:建立DN大鼠模型:SD大鼠隨機分為正常對照組(n=6)、DN模型組，曲尼斯特低劑量和高劑量治療組(n=24)。采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量STZ注射（STZ溶于0.1 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液中，pH值4.5）誘發(fā)SD大鼠DN模型，對照組只注射同等量的枸櫞酸鹽緩沖液，72h后測定各組大鼠血糖和尿糖，血糖值≥16.7mmol/L，尿糖值+++～++++者確定為糖尿病腎病模型。建模成功后，曲尼斯特治療組分別按照低

3、劑量組和高劑量組予以曲尼斯特(200mg/kg/d和400mg/kg/d)分2次灌胃。第8周末處死大鼠，取部分腎組織置于4％中性甲醛溶液中固定，采用免疫組化法觀察各組大鼠腎小管E-cadherin和α-SMA的表達及分布情況;留取部分腎組織提取組織總蛋白，用Western blot方法檢測E-cadherin和α-SMA蛋白表達情況。
　　結果:
　　1.免疫組化提示:正常大鼠腎小管上皮細胞可見明顯的E-cadherin的表

4、達，未見α-SMA表達，DN模型組腎小管上皮細胞E-cadherin的表達較正常對照組減少，并可見α-SMA表達，曲尼斯特可以一定程度的抑制這一過程。
　　2.Western blot結果提示:與正常對照組相比，DN大鼠模型早期α-SMA表達升高，E-cadherin表達降低，曲尼斯特可呈劑量依賴性的抑制它們的改變。
　　結論:
　　(1)DN大鼠早期腎小管上皮細胞可出現(xiàn)EMT。
　　(2)曲尼斯特可在一定程度上