Chemerin-ChemR23與糖尿病腎病內(nèi)皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的關(guān)系研究.pdf

1、目的:
　　Chemerin是一種新的脂肪細(xì)胞因子，主要通過(guò)其受體ChemR23發(fā)揮作用。Chemerin與轉(zhuǎn)分化刺激因子密切相關(guān)。在轉(zhuǎn)分化刺激因子的作用下，內(nèi)皮細(xì)胞可以轉(zhuǎn)分化為成纖維細(xì)胞。內(nèi)皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（ endothelial?mesenchymal transition，EndMT）是糖尿病腎病（Diabetic Nephropathy，DN）腎臟纖維化發(fā)生的重要機(jī)制。本研究旨在觀察在糖尿病大鼠腎臟疾病進(jìn)展過(guò)程中

2、Chemerin/ChemR23表達(dá)水平的變化，并分析其與糖尿病腎病中 EndMT是否具有相關(guān)性。
　　方法:
　　選取80只160-180g的雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組（n=40）和 DM模型組（n=40）。模型組12h禁食不禁飲后采用鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）75mg/kg腹腔注射來(lái)誘導(dǎo)DM大鼠模型，對(duì)照組注射等量的檸檬酸鹽緩沖液。注射STZ72h后連續(xù)三天測(cè)隨機(jī)

3、血糖≥16.7mmol/L為糖尿病造模成功。每周測(cè)大鼠隨機(jī)血糖、體重、尿白蛋白/肌酐(urinary albumin creatinine ratio,UACR)。分別于注射STZ后1、2、3、4、12周處死大鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死模型組和對(duì)照組大鼠各8只，稱(chēng)重右腎，計(jì)算腎體重比(Kidney to Body Weight Ratio,KBWR)；PAS染色觀察腎組織形態(tài)改變；免疫組化檢測(cè)腎組織中Chemerin和ChemR23的表達(dá)；免疫

4、熒光雙標(biāo)檢測(cè)腎組織中CD31和α-SMA雙陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)；Western Blot檢測(cè)腎組織中Chemerin、ChemR23、CD31、α-SMA蛋白的表達(dá)；qRT-PCR檢測(cè)大鼠腎組織中Chemerin、ChemR23、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)基因的表達(dá)；Spearman相關(guān)分析觀察Chemerin與ChemR23、TGF-β1、CD31、α-SMA、CD31和α-SMA雙陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　與

5、同周齡對(duì)照組相比模型組大鼠血糖明顯升高，出現(xiàn)多飲、多食、多尿、體重減輕；與同周齡對(duì)照組相比，模型組4周時(shí)UACR、KBWR開(kāi)始明顯升高，模型組12周時(shí)血肌酐與同周齡對(duì)照組相比顯著升高。PAS染色可見(jiàn)模型組4周時(shí)腎小球輕度肥大，模型組12周時(shí)基底膜輕度增厚，腎小球系膜細(xì)胞輕度增生，系膜基質(zhì)增多；免疫組化可見(jiàn)模型組4周和12周時(shí)大鼠腎臟中 Chemerin和ChemR23的表達(dá)水平高于同周齡正常對(duì)照組。Western Blot可見(jiàn)隨著糖尿病

6、的病程進(jìn)展，Chemerin、ChemR23、α-SMA蛋白表達(dá)逐漸增加、CD31的蛋白表達(dá)逐漸下降。qRT-PCR可見(jiàn)隨著糖尿病的病程進(jìn)展，Chemerin、ChemR23、TGF-β1的基因表達(dá)量逐漸增多。免疫熒光雙標(biāo)可見(jiàn)模型組4周和12周時(shí)CD31和α-SMA共表達(dá)細(xì)胞增多，且12周組多于4周組。Spearman相關(guān)分析顯示糖尿病大鼠腎臟中Chemerin的mRNA表達(dá)水平與ChemR23的mRNA表達(dá)水平、TGF-β1的mRNA