替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草對糖尿病腎病大鼠腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、近年來，隨著糖尿病患者族群的不斷擴大，糖尿病目前已經(jīng)成為了一個全球關(guān)注的健康問題。作為糖尿病比較常見的微血管并發(fā)癥，糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)的基本病理改變?yōu)榧毎饣|(zhì)(extra-cellular matrix，ECM)重構(gòu)，引起腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。在腎間質(zhì)纖維化的過程中，腎小管上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(Epithelial-mesenchymal-transition，EMT)起到關(guān)鍵的作用。α平

2、滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的生成是EMI’過程中關(guān)鍵的一步，提示著EMT發(fā)生的程度。轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)在體外是最有效的引起EMT的因子，骨成形蛋白-7(bone morphogenic protein-7，BMP-7)屬于TGF-β超家族，一般來說主要表達于腎小管的上皮細胞已經(jīng)以及部分足細胞。有研究顯示，當(dāng)腎小管的上皮細胞受

3、到損傷時，腎組織中的BMP-7表達明顯減少。而當(dāng)對組織進行外源性的補充BMP-7后，腎功能明顯得到改善，提示BMP-7可能為逆轉(zhuǎn)腎間質(zhì)纖維化的重要的腎臟保護因子。血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(Angiotensin Ⅱ receptor angtagonist，ARB)目前已應(yīng)用于DN的臨床治療，主要是通過其血流動力學(xué)保護腎臟，在抑制腎間質(zhì)纖維化方面的機制并不明了，冬蟲夏草作為一種中藥制劑對于腎臟的保護作用機制更是撲朔迷離。本課題通過研究糖尿

4、病腎病大鼠模型腎組織中α-SMA、BMP-7和TGF-β的表達情況，以及替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草干預(yù)下三者的表達情況，同時觀察24小時尿蛋白定量和腎功能的變化，以此探討其對于糖尿病腎病腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)節(jié)作用，并尋找替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草對于糖尿病腎病的保護機制，為糖尿病腎病的治療提供更多的途徑及理論依據(jù)。
　　 目的：
　　 通過研究糖尿病腎病大鼠模型腎組織中α-SMA、BMP-7和TGF-β的表達情況，以及替米沙坦

5、聯(lián)合冬蟲夏草干預(yù)下三者的表達情況，同時觀察24小時尿蛋白定量和腎功能的變化，以此探討其對于糖尿病腎病腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：
　　 選用雄性Wistar大鼠作為實驗對象，動物模型建立使用鏈脲佐菌素對大鼠一次性腹腔內(nèi)注射，造模成功后，將大鼠隨機分為4組：DN模型組(n=9)、替米沙坦組(n=9)，冬蟲夏草組(n=9)，替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草組(n=10)，另設(shè)正常對照組(n=10)。替米沙坦組每日給予

6、8mg/kg體重的替米沙坦灌胃一次；冬蟲夏草組按藥量2.5g/Kg蟲草水提取液灌胃給藥；聯(lián)合治療組兩種藥物均等量灌胃，對照組與模型組以等量飲用水灌胃，每日一次。所有大鼠不限食水。治療8周后，對大鼠收集24小時尿量測定尿蛋白定量；心包取血測定血糖、血尿素氮、肌酐水平;處死大鼠后采集腎臟標(biāo)本，測量大鼠腎重及腎重體重比；腎組織HE染色，測定各組大鼠腎小管-間質(zhì)病理損傷評分，利用組織免疫化學(xué)法檢測各組大鼠腎組織中BMP-7、α-SMA和TGF-

7、β的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)對血中BUN、SCr的影響：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組能明顯降低BUN、SCr水平，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)，但仍高于正常對照組；聯(lián)合用藥組與替米沙坦組、冬蟲夏草組比較有顯著性差異(P<0.01)；替米沙坦組與冬蟲夏草組比較差異無顯著性意義(P>0.05)。
　　 (2)對24小時尿蛋白的影響：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組能明顯降低24小時尿

8、蛋白水平，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)，聯(lián)合用藥組與替米沙坦組、冬蟲夏草組比較有顯著性差異(P<0.01)；替米沙坦組與冬蟲夏草組比較有顯著性意義(P<0.01)。
　　 (3)腎組織病理：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組大鼠與正常對照組大鼠相比，出現(xiàn)了不同程度腎小球硬化、腎間質(zhì)炎癥細胞浸潤、腎小管上皮細胞空泡變性及間質(zhì)纖維化，腎小管-間質(zhì)損傷指數(shù)明顯升高(P<0.01)，與DN組對比則明顯減輕(P<0.01)。<

9、br>　　 (4)腎組織免疫組化：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組大鼠腎間質(zhì)α-SMA及TGF-β陽性表達與模型組相比均顯著下調(diào)(P<0.01)，BMP-7的陽性表達則顯著上調(diào)(P<0.01)，聯(lián)合用藥組與替米沙坦組、冬蟲夏草組比較有顯著性差異(P<0.01)；替米沙坦組與冬蟲夏草組比較差異無顯著性差異(P>0.01)。
　　 (5)α-SMA及TGF-β與24小時尿蛋白定量和腎功能成明顯正相關(guān)(P<0.01)；BMP-7與

10、24小時尿蛋白定量和腎功能明顯負相關(guān)(P<0.01)：α-SMA與TGF-β呈明顯正相關(guān)(P<0.01)：BMP-7與α-SMA及TGF-β呈負相關(guān)，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.糖尿病腎病模型組α-SMA表達明顯升高，提示糖尿病腎病過程存在腎小管上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化；
　　 2.α-SMA表達上調(diào)與TGF-β明顯相關(guān)，提示TGF-β可誘導(dǎo)α-SMA的表達，促進EMT的發(fā)生：