替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草對(duì)糖尿病腎病大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、近年來，隨著糖尿病患者族群的不斷擴(kuò)大，糖尿病目前已經(jīng)成為了一個(gè)全球關(guān)注的健康問題。作為糖尿病比較常見的微血管并發(fā)癥，糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)的基本病理改變?yōu)榧?xì)胞外基質(zhì)(extra-cellular matrix，ECM)重構(gòu)，引起腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。在腎間質(zhì)纖維化的過程中，腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(Epithelial-mesenchymal-transition，EMT)起到關(guān)鍵的作用。α平

2、滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的生成是EMI’過程中關(guān)鍵的一步，提示著EMT發(fā)生的程度。轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)在體外是最有效的引起EMT的因子，骨成形蛋白-7(bone morphogenic protein-7，BMP-7)屬于TGF-β超家族，一般來說主要表達(dá)于腎小管的上皮細(xì)胞已經(jīng)以及部分足細(xì)胞。有研究顯示，當(dāng)腎小管的上皮細(xì)胞受

3、到損傷時(shí)，腎組織中的BMP-7表達(dá)明顯減少。而當(dāng)對(duì)組織進(jìn)行外源性的補(bǔ)充BMP-7后，腎功能明顯得到改善，提示BMP-7可能為逆轉(zhuǎn)腎間質(zhì)纖維化的重要的腎臟保護(hù)因子。血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(Angiotensin Ⅱ receptor angtagonist，ARB)目前已應(yīng)用于DN的臨床治療，主要是通過其血流動(dòng)力學(xué)保護(hù)腎臟，在抑制腎間質(zhì)纖維化方面的機(jī)制并不明了，冬蟲夏草作為一種中藥制劑對(duì)于腎臟的保護(hù)作用機(jī)制更是撲朔迷離。本課題通過研究糖尿

4、病腎病大鼠模型腎組織中α-SMA、BMP-7和TGF-β的表達(dá)情況，以及替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草干預(yù)下三者的表達(dá)情況，同時(shí)觀察24小時(shí)尿蛋白定量和腎功能的變化，以此探討其對(duì)于糖尿病腎病腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)節(jié)作用，并尋找替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草對(duì)于糖尿病腎病的保護(hù)機(jī)制，為糖尿病腎病的治療提供更多的途徑及理論依據(jù)。
　　 目的：
　　 通過研究糖尿病腎病大鼠模型腎組織中α-SMA、BMP-7和TGF-β的表達(dá)情況，以及替米沙坦

5、聯(lián)合冬蟲夏草干預(yù)下三者的表達(dá)情況，同時(shí)觀察24小時(shí)尿蛋白定量和腎功能的變化，以此探討其對(duì)于糖尿病腎病腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：
　　 選用雄性Wistar大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，動(dòng)物模型建立使用鏈脲佐菌素對(duì)大鼠一次性腹腔內(nèi)注射，造模成功后，將大鼠隨機(jī)分為4組：DN模型組(n=9)、替米沙坦組(n=9)，冬蟲夏草組(n=9)，替米沙坦聯(lián)合冬蟲夏草組(n=10)，另設(shè)正常對(duì)照組(n=10)。替米沙坦組每日給予

6、8mg/kg體重的替米沙坦灌胃一次；冬蟲夏草組按藥量2.5g/Kg蟲草水提取液灌胃給藥；聯(lián)合治療組兩種藥物均等量灌胃，對(duì)照組與模型組以等量飲用水灌胃，每日一次。所有大鼠不限食水。治療8周后，對(duì)大鼠收集24小時(shí)尿量測定尿蛋白定量；心包取血測定血糖、血尿素氮、肌酐水平;處死大鼠后采集腎臟標(biāo)本，測量大鼠腎重及腎重體重比；腎組織HE染色，測定各組大鼠腎小管-間質(zhì)病理損傷評(píng)分，利用組織免疫化學(xué)法檢測各組大鼠腎組織中BMP-7、α-SMA和TGF-

7、β的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)對(duì)血中BUN、SCr的影響：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組能明顯降低BUN、SCr水平，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)，但仍高于正常對(duì)照組；聯(lián)合用藥組與替米沙坦組、冬蟲夏草組比較有顯著性差異(P<0.01)；替米沙坦組與冬蟲夏草組比較差異無顯著性意義(P>0.05)。
　　 (2)對(duì)24小時(shí)尿蛋白的影響：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組能明顯降低24小時(shí)尿

8、蛋白水平，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)，聯(lián)合用藥組與替米沙坦組、冬蟲夏草組比較有顯著性差異(P<0.01)；替米沙坦組與冬蟲夏草組比較有顯著性意義(P<0.01)。
　　 (3)腎組織病理：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組大鼠與正常對(duì)照組大鼠相比，出現(xiàn)了不同程度腎小球硬化、腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤、腎小管上皮細(xì)胞空泡變性及間質(zhì)纖維化，腎小管-間質(zhì)損傷指數(shù)明顯升高(P<0.01)，與DN組對(duì)比則明顯減輕(P<0.01)。<

9、br>　　 (4)腎組織免疫組化：替米沙坦組、冬蟲夏草組及聯(lián)合用藥組大鼠腎間質(zhì)α-SMA及TGF-β陽性表達(dá)與模型組相比均顯著下調(diào)(P<0.01)，BMP-7的陽性表達(dá)則顯著上調(diào)(P<0.01)，聯(lián)合用藥組與替米沙坦組、冬蟲夏草組比較有顯著性差異(P<0.01)；替米沙坦組與冬蟲夏草組比較差異無顯著性差異(P>0.01)。
　　 (5)α-SMA及TGF-β與24小時(shí)尿蛋白定量和腎功能成明顯正相關(guān)(P<0.01)；BMP-7與

10、24小時(shí)尿蛋白定量和腎功能明顯負(fù)相關(guān)(P<0.01)：α-SMA與TGF-β呈明顯正相關(guān)(P<0.01)：BMP-7與α-SMA及TGF-β呈負(fù)相關(guān)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.糖尿病腎病模型組α-SMA表達(dá)明顯升高，提示糖尿病腎病過程存在腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化；
　　 2.α-SMA表達(dá)上調(diào)與TGF-β明顯相關(guān)，提示TGF-β可誘導(dǎo)α-SMA的表達(dá)，促進(jìn)EMT的發(fā)生：