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文檔簡介
1、目的:觀察促紅細胞生成素(EPO)對C3a介導(dǎo)的腎小管上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響,以及促紅細胞生成素對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎臟纖維化的影響。
方法:
一 體外實驗:將人近端腎小管上皮細胞(HK-2)分為6組:對照組、10U/ml EPO組、3ng/mlTGF-β組、3ng/ml TGF-β+10U/ml EPO組、0.1μM C3a組、10U/ml EPO+0.1μM C3a組;分別用RT-PCR、Wester
2、n Blot和細胞免疫熒光方法檢測HK-2細胞α-SMA、E-cadherin、C3 mRNA和蛋白的表達。
二 體內(nèi)實驗:建立腎單側(cè)輸尿管梗阻大鼠(UUO)模型,并把實驗動物分成假手術(shù)組、UUO對照組、EPO小劑量治療組(100U/Kg EPO)和EPO大劑量治療組(1000U/Kg EPO),在UUO術(shù)后第3至14天隔天腹膜內(nèi)注射給藥,所有大鼠在第14天給予甲烷麻醉后處死;觀察腎組織病理變化;免疫組化檢測各組大鼠腎臟組
3、織αSMA、E-cadherin和C3表達。
結(jié)果:
一 體外實驗:C3a和TGFβ干預(yù)HK2細胞后,α-SMA mRNA和蛋白表達增強,E-cadherin mRNA和蛋白表達減少,補體C3 mRNA和蛋白表達增強;而加入EPO干預(yù)后,則可抑制C3a和TGFβ的上述作用。
二 體內(nèi)實驗:UUO大鼠腎經(jīng)過EPO治療后,腎組織C3和α-SMA表達明顯減弱,E-cadherin表達明顯增強。
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