肝再生增強(qiáng)因子促進(jìn)肝再生的信號(hào)途徑研究.pdf

1、目的：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證明ALR可促進(jìn)肝再生，但體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)ALR能否直接使肝細(xì)胞增殖存在相反的結(jié)果。對(duì)ALR在促進(jìn)肝再生過程中和其它肝源性細(xì)胞因子的相互關(guān)系仍不完全清楚。本研究擬以鼠肝大部切除(PH)動(dòng)物模型結(jié)合體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，探討ALR間接促進(jìn)肝再生的可能信號(hào)途徑。 材料與方法：1．肝再生率評(píng)價(jià)ALR對(duì)小鼠肝大部切除(PH)后肝再生的影響；2．MTT檢測ALR與肝再生大鼠血清協(xié)同對(duì)肝細(xì)胞增殖、ALR拮抗TGF-β1抑制肝細(xì)胞增殖、

2、Kupffer或Ito細(xì)胞條件培養(yǎng)液(KCCM+／ICCM+)對(duì)肝細(xì)胞增殖以及ALR對(duì)Ito細(xì)胞增殖的影響；3．免疫組織化學(xué)觀察肝再生過程中ALR的表達(dá)變化、ALR是否結(jié)合于KC細(xì)胞膜表面、ALR對(duì)KC中IL-6和TGF-βl的表達(dá)和對(duì)Ito細(xì)胞中TGF-ct表達(dá)以及對(duì)經(jīng)TGF-βl刺激后Ito細(xì)胞中a-SMA表達(dá)的影響；4．放免法檢測ICCM+中TGF-α的含量；5.免疫細(xì)胞化學(xué)和Westernblot檢測ALR對(duì)Ito細(xì)胞中TGF-

3、β1表達(dá)和外源性ALR對(duì)肝細(xì)胞中ALR自身表達(dá)的影響。 結(jié)果：1．ALR可促進(jìn)小鼠PH后肝再生；且能協(xié)同肝再生大鼠血清促進(jìn)肝細(xì)胞增殖；2．ALR主要分布于正常肝細(xì)胞胞漿內(nèi)，大鼠PH后第2d和3d，肝臟中ALR免疫反應(yīng)陽性信號(hào)減弱消失，第6d基本恢復(fù)正常；3．ALR能拮抗TGF-Dl抑制肝細(xì)胞增殖的作用；4．外源性ALR能使肝細(xì)胞中ALR表達(dá)的增高；5．KCCM+／ICCM+能明顯促進(jìn)肝細(xì)胞增殖；6．KC細(xì)胞膜表面可能存在ALR結(jié)

4、合位點(diǎn)或受體；7．ALR能增加KC中的IL-6和Ito細(xì)胞中的TGF-α的表達(dá)而抑制KC和Ito細(xì)胞中TGF-βl的表達(dá)；放免測定顯示ICCM+中TGF-ct含量增高；8．ALR可抑制Ito細(xì)胞增殖和降低經(jīng)TGF-β1激活后，Ito細(xì)胞中α-SMA的表達(dá)量。 結(jié)論：1．ALR可能以自分泌方式釋放，與肝再生相關(guān)因子相互影響如：抑制TGF-β1生物活性，間接促進(jìn)肝再生；2．ALR可通過直接作用于KC和Ito細(xì)胞，使KC中IL-6表達(dá)