RNAi肝癌CDK2基因?qū)yclin E基因表達(dá)影響及樹(shù)舌多糖GF協(xié)同作用的研究.pdf

1、目的：通過(guò)將己構(gòu)建成功的針對(duì)CDK2基因的siRNA真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染至人肝癌細(xì)胞株SMMC7721中,研究其對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中相關(guān)基因CyclinE表達(dá)的影響,以及中藥樹(shù)舌多糖GF對(duì)其的協(xié)同作用。 方法：將構(gòu)建針成功的針對(duì)CDK2基因的siRNA真核表達(dá)載體通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑法轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株SMMC7721,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究RNAi抑制CDK2基因后對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中相關(guān)基因CyclinE的mRNA水平的影

2、響；MTT法檢測(cè)樹(shù)舌多糖GF體外對(duì)SMMC7721細(xì)胞增殖抑制情況并篩選出體外抗瘤的有效樹(shù)舌多糖GF劑量；并采用熒光定量PCR技術(shù)研究樹(shù)舌多糖對(duì)肝癌SMMC7721細(xì)胞中CyclinE基因表達(dá)的影響并探討該多糖對(duì)其的協(xié)同作用。 結(jié)果： 1.樹(shù)舌多糖GF2.5μg·mL-1、5μg·mL-1、10μg·mL-1對(duì)肝癌細(xì)胞增殖有明顯抑制作用,抑制率分別為20.01％、20.47％、24.44％。 2.樹(shù)舌多糖GF2.

3、5μg·mL-1、10μg·mL-1可使CyclinE基因mRNA表達(dá)水平下調(diào)。與SMMC7721相比,樹(shù)舌多糖GF2.5μg·mL-1組與樹(shù)舌多糖GF10μg·mL-1組CyclinE基因mRNA水平分別下調(diào)74％、68％。 3.RNAi抑制CDK2基因表達(dá)后對(duì)CyclinE基因mRNA表達(dá)有影響,siRNA190組中CyclinE基因下調(diào)20％；siRNA191組中CyclinE基因的mRNA表達(dá)下調(diào)36％。 4.與

4、單純siRNA190組相比,樹(shù)舌多糖GF10gg·mL-1+siRNA190組可使CyclinE基因的mRNA水平比單純siRNA190片段組下調(diào)提高5％；與單純siRNA191組相比,樹(shù)舌多糖GF2.5μg·mL-1、10μg·mL-1與siRNA191組合用均未能使肝癌細(xì)胞中CyclinE基因mRNA水平下調(diào)。 結(jié)論： 1.肝癌SMMC7721細(xì)胞的過(guò)度增殖與CyclinE基因過(guò)度表達(dá)關(guān)系密切。 2.樹(shù)舌多糖

5、GF對(duì)體外肝癌細(xì)胞株SMMC7721的增殖有明顯抑制作用,其機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)CyclinE基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。 3.肝癌細(xì)胞中CyclinE基因的mRNA表達(dá)對(duì)CDK2的表達(dá)有明顯的關(guān)聯(lián)性,RNAi特異地沉寂肝癌細(xì)胞中CDK2基因后,CyclinE基因表達(dá)下調(diào)。 4.樹(shù)舌多糖GF對(duì)RNAi技術(shù)特異沉寂肝癌細(xì)胞CDK2基因表達(dá)后下調(diào)CyclinE基因表達(dá)有一定的協(xié)同作用,表明樹(shù)舌多糖GF可能成為肝癌基因治療中的一個(gè)新型輔助藥