類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎基因表達(dá)譜研究及脂連素、脂連素受體基因在其發(fā)病中的意義.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是臨床常見(jiàn)的慢性炎性自身免疫病，以多關(guān)節(jié)炎癥、滑膜增生和骨侵蝕為基本特征，發(fā)病率在0.37～1％左右，致殘率高，無(wú)論在發(fā)達(dá)國(guó)家還是發(fā)展中國(guó)家，都是沉重的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)問(wèn)題。近20年來(lái)，盡管對(duì)RA的基礎(chǔ)和臨床研究不斷深入，但是尋找敏感可靠的診斷標(biāo)記和新的治療干預(yù)靶標(biāo)仍然是臨床面臨的挑戰(zhàn)性問(wèn)題。 第一部分 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎基因表達(dá)譜研究 目的：運(yùn)用基因芯片技術(shù)研究RA基因

2、表達(dá)譜特征，從全基因組角度探討RA相關(guān)致病基因，尋找新的診斷標(biāo)記和治療靶標(biāo)。 方法：提取10例活動(dòng)期RA患者和3例健康志愿者PBMC中總RNA，Illumina寡核苷酸基因芯片分析每個(gè)樣本的48.000個(gè)基因變化。RT-PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果。運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)，進(jìn)一步分析差異表達(dá)基因意義。 結(jié)果：RA病人與健康對(duì)照者相比2倍上調(diào)基因122個(gè)，2倍下調(diào)基因29個(gè)。分子及生物功能分析顯示上調(diào)表達(dá)的基因涉及細(xì)胞因子、趨化因子、細(xì)

3、胞周期、細(xì)胞凋亡、蛋白翻譯合成、代謝、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等基因種類。 結(jié)論：RA涉及多環(huán)節(jié)的病理過(guò)程，基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)了多個(gè)RA相關(guān)基因，深入研究這些基因在RA中的意義，有利于進(jìn)一步理解RA分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)記和治療靶標(biāo)。 第二部分 脂聯(lián)素及其受體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的表達(dá) 目的：研究脂聯(lián)素(Adiponectin，AD)及其受體1，2(Adiponectin receptor,AdipoR1，AdipoR2)

4、基因在RA中的表達(dá)情況及其意義。 方法： 1.運(yùn)用Real-time PCR分析RA、骨關(guān)節(jié)炎(Osteroarthritis，OA)、健康志愿者PBMC中，RA、OA滑膜組織中AD、AdipoR1、AdipoR2 mRNA表達(dá)情況。 2.運(yùn)用Westem-blot及免疫組織化學(xué)分析RA、OA滑膜組織中AD、AdipoR1、AdipoR2蛋白表達(dá)情況。 3.運(yùn)用ELISA測(cè)定RA、OA及健康志愿者血清中，

5、RA、OA關(guān)節(jié)液中AD及細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNFα、MCP-1和MMP9的含量。 4.以重組人AD因子刺激滑膜成纖維細(xì)胞，ELISA測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNFα、MCP-1和MMP9的含量。 5.以重組人AD因子Wistar大鼠關(guān)節(jié)腔注射，評(píng)價(jià)誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎癥情況。 結(jié)果： 1.RA PBMC和滑膜組織中AdipoR1 mRNA表達(dá)明顯高于OA及健康對(duì)照組

6、(p<0.05)。AdipoR2 mRNA在RA和對(duì)照組的PBMC及滑膜組織中表達(dá)無(wú)明顯差異。ADmRNA在各組PBMC中未能檢測(cè)到表達(dá)，但RA滑膜組織表達(dá)中明顯高于OA中(p<0.05)。 2.RA滑膜組織中AD和AdipoR1蛋白表達(dá)量明顯高于OA組織中，AdipoR2在RA和OA組織中表達(dá)無(wú)明顯差別。 3.RA、OA及健康志愿者血清中AD含量無(wú)明顯差別，但是RA關(guān)節(jié)液中AD含量明顯高于OA中(p<0.05)。關(guān)節(jié)液

7、中AD含量和關(guān)節(jié)液IL-6水平及病程正相關(guān)。 4.以重組人AD因子刺激滑膜成纖維細(xì)胞24小時(shí)后，能誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞選擇性分泌IL-6和MCP-1。 5.以重組人AD因子大鼠關(guān)節(jié)腔注射后，關(guān)節(jié)腔及滑膜周圍見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 結(jié)論：AD具有促炎因子屬性，AD和其受體AdipoR1基因在RA滑膜組織和關(guān)節(jié)液中高表達(dá)表明其參與了RA的病理過(guò)程。 研究意義及創(chuàng)新點(diǎn)： 1.通過(guò)基因芯片技術(shù)對(duì)RA病人PBMC進(jìn)行全基因組分析