黃芩苷對(duì)TCR Vβ、CD79、IL-1RⅠ mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究黃芩苷對(duì)人外周血T細(xì)胞TCRVβmRNA、B細(xì)胞CD79amRNA、單核細(xì)胞IL-1RImRNA表達(dá)的影響以及TCRαβ、BCRmIgM、IL-1RI是否是黃芩苷作用受體。 方法：1、分離細(xì)胞：采用Ficoll分離液法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞，再以貼壁黏附法分離單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，最后將收集得到的淋巴細(xì)胞用尼龍毛柱法分離出T、B淋巴細(xì)胞。2、將收集的T、B淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞分組培養(yǎng)：T、B細(xì)胞各分四個(gè)處理組，分別是空白對(duì)

2、照組（T1、B1）、黃芩苷組（T2、B2）、抗體封閉用藥組（T3、B3）和抗體封閉對(duì)照組（T4、B4），其中T細(xì)胞用抗TCRαβ單克隆抗體封閉TCR，B細(xì)胞用抗BCRmIgMF（ab’）2封閉mIgM。單核細(xì)胞分三個(gè)處理組，分別是空白對(duì)照組（M1）、黃芩苷組（M2）、IL-1ra（IL-1受體拮抗劑）競(jìng)爭(zhēng)抑制組（M3）。各組細(xì)胞同時(shí)置37℃5％CO2箱培養(yǎng)48h。3、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：利用Trizol法分別提取各組細(xì)胞的總RNA，以總RNA為

3、模板逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，-70℃保存。4、熒光定量PCR：以Genebank中的人源性TCRVβ、CD79a、CD79b、IL-1RImRNA序列為目標(biāo)基因，利用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計(jì)引物。以cDNA為模板，結(jié)合溫度梯度曲線分析和產(chǎn)物熔解曲線分析尋找各待檢指標(biāo)的最佳退火溫度，依據(jù)其結(jié)果制定不同的擴(kuò)增程序，利用SYBRGreenI定量PCR（qPCR）分別檢測(cè)各T細(xì)胞組TCRVβmRNA、各B細(xì)胞組CD79mRNA

4、以及各單核細(xì)胞組IL-1RImRNA的表達(dá)。 結(jié)果：1、T細(xì)胞組：T2組較T1組TCRVβmRNA相對(duì)表達(dá)明顯增加（p<0.01），T3組較T2組TCRVβmRNA相對(duì)表達(dá)明顯降低（p<0.01），且T3組較T4、T1組TCRVβmRNA相對(duì)表達(dá)輕度增高，但無(wú)顯著性差異（P>0.05）。2、B細(xì)胞組：B2組較Bl組CD79a、CD79bmRNA相對(duì)表達(dá)均明顯增強(qiáng)（p<0.01），B3組較B2組CD79a、CD79bmRNA相對(duì)表

5、達(dá)均明顯抑制（P<0.01），且B3組較B4、B1組CD79a、CD79bmRNA相對(duì)表達(dá)均輕度增高，但無(wú)顯著性差異（P>0.05）。3、單核細(xì)胞組：M2組較M1組IL-1RImRNA相對(duì)表達(dá)明顯增加（p<0.01），M3組較M2組IL-1RImRNA相對(duì)表達(dá)明顯抑制（P<0.01），且M3組較M1組IL-1RImRNA相對(duì)表達(dá)輕度增高，但無(wú)顯著性差異（P>0.05）。 結(jié)論：1、T細(xì)胞組：黃芩苷能顯著增加T細(xì)胞TCRVβmRN