舒洛地特對(duì)糖尿病大鼠腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、糖尿病腎病是糖尿病患者嚴(yán)重的并發(fā)癥，也是終末期腎功能衰竭最常見的病因。但是目前糖尿病腎病尚無有效的治療方法，因此，尋找糖尿病腎病的有效治療途徑，一直是腎臟病領(lǐng)域亟待解決的重要課題。既往研究證實(shí)，舒洛地特可以降低糖尿病腎病的尿蛋白，對(duì)腎臟起到保護(hù)作用，但舒洛地特的腎臟保護(hù)機(jī)制僅存在幾種假說，確切機(jī)制不明。糖尿病腎病主要病理變化包括腎小球肥大，腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚，腎小球基底膜增厚和腎小球硬化。其中腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚在腎小球硬化的發(fā)生、發(fā)

2、展中起著至關(guān)重要的作用。那么，舒洛地特是否能通過抑制腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚而起到腎臟保護(hù)作用，目前尚未見相關(guān)報(bào)道。因此，我們建立糖尿病大鼠模型，然后在此基礎(chǔ)上研究舒洛地特對(duì)糖尿病大鼠腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚的影響，并探討其分子機(jī)制。
　　目的：建立2型糖尿病大鼠模型，觀察舒洛地特對(duì)糖尿病大鼠腎損害的保護(hù)作用及對(duì)腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚的影響，初步探討舒洛地特抑制糖尿病大鼠腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚的分子機(jī)制。
　　方法：首先從SD大鼠中隨機(jī)

3、取出10只，設(shè)為正常對(duì)照組(C組)。其余50只大鼠予以高脂、高糖飼料喂養(yǎng)1個(gè)月后，腹腔注射鏈脲佐菌素造模。將造模成功的40只大鼠隨機(jī)分為糖尿病模型組(DM組)、不同劑量的舒洛地特治療組(DMS1組、DMS2組)和替米沙坦治療組(DMT組)，分別給予5mg/kg/d、10mg/kg/d舒洛地特肌肉注射和5mg/kg/d替米沙坦水溶液灌胃治療。治療8周后觀察24h尿白蛋白定量、腎臟肥大指數(shù)、血糖、糖化血紅蛋白、血尿素氮及血肌酐的變化；光鏡及

4、電鏡下觀察腎組織病理學(xué)改變；并通過免疫組織化學(xué)法及Westernblot觀察腎組織中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1．實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)：治療結(jié)束時(shí)(8周)，大鼠24h尿白蛋白定量、腎臟肥大指數(shù)在DM組顯著升高(P<0.01)，各治療組顯著下降，其中以DMS2組和DMT組下降最為顯著(P<0.

5、05或P<0.01)，但仍高于C組，而二者之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。大鼠血糖、糖化血紅蛋白水平在DM組顯著升高(P<0.01)；各治療組無明顯下降(P>0.05)。各組大鼠血尿素氮水平均無明顯升高(P>0.05)。大鼠血肌酐水平在DM組顯著升高(P<0.01)；各治療組血肌酐升高幅度低于DM組升高幅度，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2．在光鏡下，C組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見腎小球增大及異常改變。DM組

6、大鼠腎小球增大，系膜細(xì)胞、基質(zhì)增生，系膜區(qū)增寬，毛細(xì)血管壁增厚。各治療組腎組織的病理改變較DM組均有不同程度的減輕，其中以DMS2組、DMT組上述病變減輕明顯。治療8周時(shí)，大鼠腎小球面積、腎小球細(xì)胞外基質(zhì)面積在DM組顯著增加(P<0.01)；各治療組顯著減少(P<0.01)，其中以DMS2組、DMT組減少最為顯著(P<0.05)，而二者之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。電鏡下DM組可見腎小球基底膜彌漫或局限性增厚，系膜區(qū)增寬，足

7、突融合、消失。各治療組腎組織的病理變化較DM組均有不同程度的減輕，其中以DMS2組和DMT組上述病變減輕明顯。
　　3．免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，治療結(jié)束時(shí)，大鼠腎組織中TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1陽性面積比值在DM組明顯增加，各治療組明顯減少，尤其TGF-β1、CTGF、TIMP-1在DMS2組和DMT組減少更為顯著，但仍低于C組(P<0.01或P<0.05)；MMP-9陽性面積比值在各治療組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

8、義(P>0.05)。MMP-9/TIMP-1的比值在DM組明顯減少，各治療組明顯升高，尤其在DMS2組和DMT組升高更顯著，但仍低于C組(P<0.01)。
　　4．Western blot結(jié)果顯示，治療結(jié)束時(shí)，大鼠腎組織中TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1在DM組表達(dá)明顯增加，各治療組表達(dá)明顯減少，尤其TGF-β1、CTGF、TIMP-1在DMS2組和DMT組表達(dá)減少更為顯著，但仍低于C組(P<0.01)；MMP-9

9、的表達(dá)在各治療組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。MMP-9/TIMP-1的比值在DM組明顯減少，各治療組明顯升高，尤其在DMS2組和DMT組升高更顯著，但仍低于C組(P<0.01或P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1．舒洛地特可以降低糖尿病大鼠尿中白蛋白排泄量，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，對(duì)腎臟具有保護(hù)作用，但這種腎臟保護(hù)作用與降低血糖無關(guān)。
　　2.舒洛地特可以降低糖尿病大鼠腎臟肥大指數(shù)，并減輕腎小球系膜區(qū)增寬、基底膜