IMP-重組蛋白純化、遺傳環(huán)境及產(chǎn)IMP-38菌株毒力基因研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：①獲得并純化金屬酶新亞型IMP-38重組蛋白。②探討IMP-38基因的遺傳環(huán)境。③了解產(chǎn)IMP-38肺炎克雷伯菌菌株毒力基因分布。
　　方法：⑴構建PUC19/IMP-38重組質(zhì)粒驗證IMP-38基因序列。⑵構建原核表達載體pet-28a+/IMP-38，對目的基因誘導表達、純化及復性。⑶提取9株產(chǎn)IMP-38菌株基因組DNA，采用普通PCR、長片段PCR和重疊延伸PCR探討IMP-38基因與整合子、轉(zhuǎn)座子關系。⑷提取9株產(chǎn)

2、IMP-38菌株基因組DNA，PCR檢測7種莢膜血清型基因和25種毒力基因。
　　結果：①成功構建PUC19/IMP-38重組質(zhì)粒，證明前期測序結果完全正確，確定本研究IMP基因為IMP新亞型-IMP-38。②成功構建原核表達載體pet-28a+/IMP-38，目的基因大量表達且獲得純度較高的重組蛋白。③IMP-38基因位于Ⅰ類整合子上，后者位于轉(zhuǎn)座子Tn402-like上。產(chǎn)IMP-38菌株上攜帶mer1696操縱子、Tn505

3、1轉(zhuǎn)座子，且存在tnp513、IS26、tnpU和IS5075等遺傳標記。④9株產(chǎn)IMP-38肺炎克雷伯菌中發(fā)現(xiàn)了4株產(chǎn)9種毒力基因菌株，分別為fimH1、mrkD、ycfm、kpn、entB、irp-2、uge、wabG和ureA，未發(fā)現(xiàn)其他毒力基因和上述莢膜血清型基因。
　　結論：⑴本研究IMP基因為IMP新亞型-IMP-38。⑵成功構建原核表達載體pet-28a+/IMP-38，獲得純化的重組蛋白。⑶IMP-38基因位于Ⅰ類

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