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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheResearchonCharacteristicsofELPandtheELPtaggedSystemforProteinPurificationByJunYuanSupervisor：ProfJu’eZhangDepartmentofBiochemistryandMolecularBiol
2、ogyBasicMedicalCollegeApril2014摘要EkP特性研究及ELP標(biāo)簽在重組蛋白純化中的應(yīng)用目的研究生：袁君導(dǎo)師：張菊娥教授鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室河南鄭州450001摘要探討類彈性蛋白多肽(ELP)的可逆相變循環(huán)(ITC)特性，以及運用ELP作為標(biāo)簽對In目的蛋白進(jìn)行表達(dá)純化，觀察ELP融合蛋白的ITC性質(zhì)以及影響其可逆相變溫度的因素，以期獲得ELP在更多蛋白分離純化中的應(yīng)用。方法1ELP基因
3、及其引物，目的基因In及ELPIn連接引物的合成，并以合成基因為模板進(jìn)行擴(kuò)增。2ELP／pGEM—Teasy，ELPIn／pGEMTeasy重組克隆載體的建立，將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH50t感受態(tài)中，涂LA固體培養(yǎng)基平板，挑取單克隆至LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，送去測序。3將測序正確的單克隆菌液取少量用于提取質(zhì)粒，進(jìn)行雙酶切后膠回收目的片段，連接至表達(dá)載體pET28b中，構(gòu)建重組表達(dá)載體ELP／pET28b和ELPIn／pET28b，
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