2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:
  肺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率逐年升高,然而目前仍然缺乏有效的防治手段。蛋白酪氨酸激酶已經(jīng)被證明在肺癌的發(fā)病中扮演著重要角色,酪氨酸激酶抑制劑也在肺癌的治療中取得了肯定的療效。NOK是一種新的蛋白酪氨酸激酶,目前的研究發(fā)現(xiàn)其在急性白血病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌等多種腫瘤組織中表達(dá),可能是一種新的候選癌基因。然而,NOK在肺癌發(fā)病中的作用尚缺乏充分的臨床證據(jù)支持,其通過何種機(jī)制參與肺癌發(fā)病、受何種信

2、號通路調(diào)節(jié)也不甚清楚。為此,本實驗從臨床研究,細(xì)胞功能學(xué)實驗及機(jī)制研究三個方面探索 NOK在肺癌發(fā)病中的作用及機(jī)制,以期為肺癌的發(fā)病機(jī)制和靶向治療研究提供新的思路。
  方法:
  1.隨機(jī)入組2007年至2010年在第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院胸腔外科行手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌患者191例并進(jìn)行隨訪,有以下條件之一者予以排除:接受術(shù)前化療者;接受術(shù)前放療者;接受TKIs等靶向藥物治療者。病人信息的采集包含以下要素:年齡、性別、吸煙史

3、、臨床癥狀、手術(shù)方式、腫瘤大小、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、術(shù)后病理結(jié)果。收集上述患者術(shù)中切除的腫瘤組織標(biāo)本并進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,ROC檢驗確立陽性標(biāo)準(zhǔn),χ2-test法分析NOK蛋白表達(dá)與各臨床要素的相關(guān)性,Kaplan-Meier法繪制生存曲線,log-rank test法分析NOK蛋白表達(dá)與患者生存時間之間的關(guān)系;Cox風(fēng)險比例模型法分析生存時間和臨床要素之間的單因素和多因素相關(guān)性。
  2.利用電穿孔法在肺癌A549細(xì)胞中

4、轉(zhuǎn)染NOK全長質(zhì)粒,設(shè)計干涉NOK基因表達(dá)的 RNAi片段并用慢病毒包裝后感染肺癌 H520細(xì)胞,分別構(gòu)建穩(wěn)定過/低表達(dá)NOK基因的肺癌細(xì)胞系。細(xì)胞劃痕實驗及Transwell小室遷移實驗分析NOK過/低表達(dá)后對肺癌細(xì)胞遷移能力的影響。Transwell小室侵襲實驗分析NOK過/低表達(dá)后對肺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。
  3.運用 qRT-PCR實驗檢測 NOK過/低表達(dá)后對肺癌細(xì)胞中 EMT標(biāo)志物E-cadherin、Vimenti

5、n基因表達(dá)的影響;運用Western Blot實驗檢測NOK過/低表達(dá)后對肺癌細(xì)胞中EMT標(biāo)志物E-cadherin、Vimentin蛋白表達(dá)的影響
  4.運用10-9M的雌二醇刺激肺癌H520和Calu-1細(xì)胞,用qRT-PCR方法分別檢測在雌二醇刺激0h/2h/12h/24h后肺癌細(xì)胞中NOK基因的表達(dá)情況;運用Western Blot實驗檢測在雌二醇刺激0h/12h后肺癌細(xì)胞中 NOK蛋白的表達(dá)情況。利用生物信息學(xué)分析NO

6、K啟動子區(qū),尋找潛在的ERE結(jié)合位點。
  結(jié)果:
  1.NOK蛋白在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。在收集的191例肺癌組織標(biāo)本中,NOK蛋白在腫瘤組織中的陽性率為75.4%(144/191),在癌旁組織中的陽性率為14.1%(27/191)。NOK的表達(dá)在腫瘤的不同病理分級(P=0.035)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.005)、pTNM分期(P=0.020)及Ki-67指數(shù)(P=0.000)分組中具有顯著的組間差異性;在不

7、同性別(P=0.371)、年齡(P=0.470)、吸煙史(P=0.618)、組織學(xué)類型(P=0.332)及pT分期(P=0.525)分組中未見明顯差異性。NOK蛋白表達(dá)陽性的144例肺癌患者中位生存時間為38月(95%confidence interval[CI]=26-50月),平均生存時間為34月(95%CI=30-39月);NOK蛋白陰性表達(dá)的47例肺癌患者平均生存時間為48月(95%CI=43-54月),中位生存時間無法求得,l

8、og-rank test統(tǒng)計結(jié)果顯示NOK蛋白的表達(dá)對肺癌患者的生存情況有顯著影響(P=0.004),NOK蛋白陽性表達(dá)的肺癌患者生存時間縮短。在鱗癌患者中,NOK蛋白陽性表達(dá)的肺癌患者較NOK蛋白陰性表達(dá)的患者生存時間更短(P=0.022)。在腺癌患者中,NOK蛋白陽性表達(dá)的肺癌患者與NOK蛋白陰性表達(dá)的患者生存時間之間無明顯差異(P=0.054)。在pTNM I/II期肺癌患者中,NOK蛋白陰性表達(dá)的患者生存時間與陽性表達(dá)患者之間無

9、明顯差異(P=0.061)。在pTNM III/IV分期的肺癌患者中,NOK蛋白陰性表達(dá)的患者生存時間與陽性表達(dá)患者之間無明顯差異(P=0.144)。Cox風(fēng)險比例模型的單因素和多因素分析結(jié)果顯示,NOK蛋白的表達(dá)是影響肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素之一。
  2.基因測序,qRT-PCR及Western Blot實驗驗證NOK過/低表達(dá)細(xì)胞系構(gòu)建成功。細(xì)胞劃痕實驗及Transwell小室遷移結(jié)果顯示過表達(dá)NOK基因的肺癌細(xì)胞系遷移能

10、力增強(qiáng),低表達(dá)NOK基因的肺癌細(xì)胞系遷移能力減弱。Transwell小室侵襲實驗結(jié)果顯示過表達(dá)NOK基因的肺癌細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng),低表達(dá)NOK基因的肺癌細(xì)胞侵襲能力減弱。
  3.qRT-PCR及Western Blot實驗結(jié)果顯示:在過表達(dá)NOK基因的肺癌細(xì)胞系中,EMT標(biāo)志物E-cadherin的基因和蛋白表達(dá)水平降低、Vimentin基因和蛋白表達(dá)水平升高;在低表達(dá)NOK基因的肺癌細(xì)胞系中,EMT標(biāo)志物E-cadherin的基

11、因和蛋白表達(dá)水平升高、Vimentin基因和蛋白表達(dá)水平降低。
  4.在H520細(xì)胞中加入雌激素后,NOK基因的表達(dá)水平逐漸升高,在12h時達(dá)到峰值;在Calu-1細(xì)胞中加入雌激素后,NOK基因的表達(dá)水平則逐漸降低,12h后逐步回升。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示:在距離NOK轉(zhuǎn)錄起始位點-1051bp,-1781bp,-2410bp存在著3個潛在的雌激素應(yīng)答原件。
  結(jié)論:
  1.通過臨床研究,我們發(fā)現(xiàn) NOK在肺癌組

12、織中有較高的陽性表達(dá)率,其表達(dá)和肺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、pTNM分期等臨床要素相關(guān),是影響肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素之一。
  2.在細(xì)胞功能學(xué)實驗中,我們進(jìn)一步證實 NOK可以促進(jìn)肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲,同時其表達(dá)變化能夠影響肺癌細(xì)胞的EMT過程。
  3.我們首次發(fā)現(xiàn)雌激素在肺癌細(xì)胞中能夠調(diào)節(jié) NOK基因的表達(dá),這可能是雌激素參與肺癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。由此我們首次提出了雌激素-NOK-EMT-肺癌轉(zhuǎn)移的新的潛在肺癌致病機(jī)制,有

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