血小板在肺癌進(jìn)程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分臨床研究血小板參數(shù)在肺癌患者化療預(yù)后評價中的意義
　　背景：在我國，肺癌的發(fā)病率及死亡率均居惡性腫瘤的第一位，由于其易局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響著國人的健康?；熕幬锏闹饕饔檬菤┘?xì)胞，但化療藥物在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時對機(jī)體內(nèi)的正常細(xì)胞也造成了損傷，導(dǎo)致不同程度的血球減少和血小板減少。然而近年來研究證實(shí)血小板對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移具有強(qiáng)烈的促進(jìn)作用，這可能是造成腫瘤患者不良預(yù)后的重要原因之一。肺癌惡性程度高、預(yù)后差，尚無簡單

2、明了的生物學(xué)指標(biāo)可直觀反映其療效及預(yù)后。血小板是一組異質(zhì)性的群體，血小板參數(shù)不僅可以反映血小板質(zhì)和量的變化，還可以反映出機(jī)體內(nèi)血小板增殖動力學(xué)的情況，故本研究血小板參數(shù)與腫瘤化療的關(guān)系，為腫瘤的診斷和治療效果提供新的評價體系。
　　目的：探討血小板參數(shù)與肺癌患者化療預(yù)后的關(guān)系。
　　方法：回顧性分析164例肺癌患者的臨床及病理資料，比較81例血小板增多的肺癌患者與83例血小板非增多肺癌患者血小板參數(shù)的變化，分析兩組患者化療預(yù)

3、后的差異。
　　結(jié)果：COX多因素分析顯示血小板計(jì)數(shù)、TNM分期、病理類型具有獨(dú)立預(yù)后價值(P＜0.05)。平均血小板體積(MPV)、血小板/淋巴細(xì)胞比值(PLR)、癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段(CY211)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)與肺癌患者化療預(yù)后無明顯相關(guān)性。單因素分析顯示血小板增多的肺癌患者與血小板非增多的肺癌患者接受化療后長期生存期分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：血小板參數(shù)中血小板

4、計(jì)數(shù)增多是影響肺癌患者化療后生存的獨(dú)立危險因素，而MPV、PLR與肺癌化療預(yù)后無明顯相關(guān)性。血小板計(jì)數(shù)可能是評估肺癌患者化療預(yù)后情況的可靠指標(biāo)。
　　第二部分體外實(shí)驗(yàn)研究血小板促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞增殖和遷移并對化療產(chǎn)生抵抗
　　背景：肺癌是是臨床上最為常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢，目前死亡率已是全世界范圍內(nèi)惡性腫瘤的首位。無限增殖和浸潤轉(zhuǎn)移成為肺癌死亡的重要原因，也為臨床治療提供了難題。早在1865年，Trouss

5、eau就發(fā)現(xiàn)血小板與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性，惡性腫瘤常呈高凝狀態(tài)，并且普遍存在富含血小板的微血栓。腫瘤細(xì)胞因?yàn)闆]有負(fù)反饋控制機(jī)制的限制,所有導(dǎo)致其能無限增殖，腫瘤的治療缺乏有效的化療藥物導(dǎo)致持久腫瘤細(xì)胞長時間生存。前面的臨床研究我們發(fā)現(xiàn)血小板可以影響肺癌患者的化療預(yù)后。越來越多的研究報(bào)道也證實(shí)血小板與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),血小板可以促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展和演進(jìn)。本研究通過體外模擬肺腺癌細(xì)胞生長的環(huán)境來探索血小板對肺腺癌生物學(xué)影響，并探索血小板在

6、化療中的肺腺癌細(xì)胞生存和死亡中的作用，為腫瘤的早期預(yù)防和治療提供新的突破點(diǎn)。
　　目的：（1）探索血小板對肺腺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響；
　　（2）揭示血小板在化療肺腺癌細(xì)胞的作用；
　　（3）探討血小板對肺腺癌作用機(jī)制。
　　方法：（1）通過CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度血小板對A549細(xì)胞增殖的影響；
　?。?）通過流式細(xì)胞儀觀察血小板對A549細(xì)胞生存和死亡的影響以及血小板對化療藥物的作用；
　?。?

7、）通過劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察血小板對A549細(xì)胞遷移能力的影響；
　?。?）通過免疫印跡法檢測血小板與A549細(xì)胞共培養(yǎng)后,ERK1/2,JNK，p-ERK,p–JNK,MMP-2,MMP-9,Bcl-2,Bax的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）血小板能夠促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞增殖，并呈現(xiàn)濃度依賴性，在48h,增殖效果顯著；
　　（2）血小板能夠抑制A549細(xì)胞的凋亡，并對化療藥物吉西他濱產(chǎn)生抵抗作用；
　

8、?。?）劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示血小板增強(qiáng)肺腺癌細(xì)胞的遷移能力；
　　（4）蛋白印跡法顯示血小板作用0h,12h,24h,48h,ERK1/2,JNK，p-ERK,p-JNK,MMP-2,MMP-9,Bcl-2表達(dá)明顯增加,Bax的表達(dá)明顯降低。
　　結(jié)論：血小板可以在體外刺激A549細(xì)胞增長和遷移，并且這種增長和遷移與血小板濃度呈正相關(guān)。血小板的刺激可以激活MAPKs通路中p-ERK，p-JNK，MMP-