過氧化氫對豬骨髓來源內(nèi)皮前體細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的初步研究.pdf

1、本實驗在體外培養(yǎng)豬骨髓源內(nèi)皮前體細(xì)胞的基礎(chǔ)上，調(diào)整培養(yǎng)基內(nèi)過氧化氫濃度，至培養(yǎng)終點(diǎn)，通過對內(nèi)皮前體細(xì)胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)的細(xì)胞存活率、凋亡率、乳酸脫氫酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量的測定，初步研究氧化應(yīng)激對EPCs的損傷作用。 實驗方法： 第一部分：豬骨髓源EPCs的體外分離、擴(kuò)增及鑒定。在無菌的條件下抽取豬骨髓，用Ficoll密度梯度離心法分離骨髓單個核細(xì)胞，經(jīng)過

2、差速貼壁分離出EPCs，接種在添加特定濃度VEGF、bFGF的培養(yǎng)基中。原代細(xì)胞經(jīng)CD133和VEGFR-2雙染陽性鑒定為EPCs。 第二部分：不同濃度過氧化氫對EPCs的氧化應(yīng)激損傷效應(yīng)及復(fù)方丹參注射液的拮抗作用。取原代培養(yǎng)的EPCs，在其培養(yǎng)基中添加不同濃度的過氧化氫及復(fù)方丹參注射液，至培養(yǎng)終點(diǎn)，MTT法測定細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，并測定培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶活性、丙二醛含量。 實驗結(jié)果： 1、體外

3、成功培養(yǎng)出豬骨髓源EPCs，并經(jīng)鑒定證實。 2、與空白對照組比較，不同濃度的過氧化氫均可使EPCs存活率降低(P＜0.05)，組間相比亦有顯著性差異(F=545.69，P==0.00)；不同濃度過氧化氫均可使LDH漏出增多(P＜0.05)，組間相比亦有顯著性差異(F=308.12，P=0.00)；不同濃度過氧化氫均可使MDA含量增高(P＜0.05)，組間相比亦有顯著性差異(F=679.97，P=0.00)；不同濃度過氧化氫均可使

4、細(xì)胞凋亡率上升(P＜0.05)，組間相比亦有顯著性差異(F=132.40，P=0.00)。3、與空白對照組比較，100μM過氧化氫顯著降低EPCs存活率(P＜0.01)，使LDH漏出增多(P＜0.01)、MDA含量增加(P＜0.01)、細(xì)胞凋亡率上升(P＜0.01)；復(fù)方丹參注射液可使上述結(jié)果改變，5mg/ml濃度復(fù)方丹參注射液總體效果最佳。 研究結(jié)論：過氧化氫可對EPCs造成氧化應(yīng)激損傷，表現(xiàn)為細(xì)胞存活率下降、LDH漏出、MD