牙本質(zhì)粘結(jié)混合層仿生再礦化的體外研究.pdf

1、研究背景：
　　 樹(shù)脂粘結(jié)中單體和水替換不理想造成樹(shù)脂浸潤(rùn)粘結(jié)界面不徹底，影響牙本質(zhì)復(fù)合樹(shù)脂的長(zhǎng)期效果，為避免這種“未完全樹(shù)脂浸潤(rùn)層”導(dǎo)致的“納米滲漏”，學(xué)者們的研究主要集中于裸露膠原纖維的再礦化，利用兩種牙本質(zhì)非膠原蛋白仿生類(lèi)似物，來(lái)改善牙本質(zhì)混合層的再礦化。
　　 目的：
　　 探討采用雙仿生類(lèi)似物聚乙烯磷酸和聚丙烯酸影響3種粘結(jié)劑：Fluoro-BondⅡ(FL，Shofu，日本)；xenoⅢ(xeno，D

2、entsply，德國(guó))和iBond(ib，Heracus，德國(guó))和牙本質(zhì)所形成的樣本樹(shù)脂-牙本質(zhì)界面再礦化程度，比較樣本浸泡在模擬體液或再礦化液1，2，3和4個(gè)月后牙本質(zhì)粘結(jié)界面的再礦化程度評(píng)價(jià)參數(shù)的差異。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)分組和樣本制備
　　 將96顆健康前磨牙按照FL、xenoⅢ和iBond粘結(jié)劑隨機(jī)分為3組，每組32顆。每顆牙均暴露表層牙本質(zhì)，600目SiC水砂紙濕性打磨牙本質(zhì)表面，3種粘結(jié)劑分

3、別嚴(yán)格按照各自產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)處理牙本質(zhì)表面，牙合面堆制樹(shù)脂厚4-5mm，每顆牙沿牙合-齦向切成0.9mm厚的薄片，獲取中間兩片樣本用于礦化組和模擬組。礦化組采用含聚乙烯磷酸和聚丙烯酸的再礦化液漫泡，模擬組采用不含聚乙烯磷酸和聚丙烯酸的模擬體液浸泡。各材料觀(guān)察時(shí)間分別為1，2，3和4個(gè)月。
　　 2.再礦化液的準(zhǔn)備和樣本保存條件
　　 模擬體液配制：同參考文獻(xiàn)(Kokubo等，1990)；再礦化液配制：同參考文獻(xiàn)(Tay FR

4、，Pashley DH，2008)。礦化組浸泡在裝有約1g硅酸鹽水泥和15ml再礦化液的密封瓶?jī)?nèi)，模擬組浸泡在裝有約1g硅酸鹽水泥和15ml模擬體液的密封瓶?jī)?nèi)，37℃恒溫箱條件下各組標(biāo)本在儲(chǔ)存1、2、3和4個(gè)月后各取出8片。
　　 3.激光共聚焦顯微鏡(Confocal laser scanning microscopy，CLSM)
　　 以新鮮配制的0.1mmol/L蘇丹明B熒光染料對(duì)樣本染色24h，沖洗，吹干，置CL

5、SM下觀(guān)察滲入混合層的熒光情況，實(shí)驗(yàn)前后均保持參數(shù)不變。通過(guò)計(jì)算機(jī)成圖并由Image-Pro-Plus6.0軟件測(cè)量熒光面積(Area of Fluorescence，A)、平均熒光量(Average Fluorescence，AF)及總熒光量(Total Fluorescence，TF)。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 比較各組數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)價(jià)仿生類(lèi)似物對(duì)“未完全樹(shù)脂浸潤(rùn)”混合層再礦化的效應(yīng)，以及在不同粘結(jié)劑組別和時(shí)間上的差異

6、。統(tǒng)計(jì)方法采用One-way ANOVA(Tukey HSD)檢驗(yàn)方法。結(jié)果使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.CLSM照片定量分析
　　 含雙仿生類(lèi)似物再礦化液對(duì)各組樣本在不同浸泡時(shí)間的仿生再礦化效應(yīng)通過(guò)粘結(jié)界面的熒光面積的改變來(lái)體現(xiàn)。
　　 FL粘結(jié)劑模擬組在模擬體液中浸泡1-4個(gè)月粘結(jié)界面的熒光面積均保持一致，無(wú)顯著性差異(P>0.05)；礦化組在再礦化體液浸泡1-3個(gè)月粘結(jié)

7、界面的熒光面積分別與浸泡同期模擬組相比均未出現(xiàn)顯著差異(P>0.05)，直到第4個(gè)月該值才出現(xiàn)顯著性降低(P<0.05)，提示FL粘結(jié)界面在再礦化液中作用4個(gè)月時(shí)出現(xiàn)再礦化現(xiàn)象。
　　 xenoⅢ粘結(jié)劑模擬組在模擬體液中浸泡第2個(gè)月即出現(xiàn)熒光面積增大(P<0.05)，并在第3-4個(gè)月維持相似的熒光面積，提示xenoⅢ粘結(jié)劑在粘結(jié)后2個(gè)月即出現(xiàn)膠原降解或者基底礦物質(zhì)去礦化現(xiàn)象；礦化組粘結(jié)界面在整個(gè)浸泡期維持相似的熒光面積(P>0.

8、05)，并不隨浸泡時(shí)間變化而變化，只能說(shuō)明再礦化液浸泡能夠起到抵制基底礦物繼續(xù)丟失或阻止膠原降解的作用。
　　 ibond粘結(jié)劑模擬組在模擬體液中浸泡1-4個(gè)月粘結(jié)界面的熒光面積無(wú)明顯變化(P>0.05)；礦化組在再礦化液浸泡2個(gè)月后即出現(xiàn)熒光面積顯著下降(P<0.05)，并持續(xù)至第3個(gè)月達(dá)到最小熒光面積，到第4個(gè)月時(shí)又重新回到第2個(gè)月水平，可見(jiàn)其混合層再礦化現(xiàn)象有著一定的自限性。
　　 2.CLSM照片定性分析

9、　　 FL粘結(jié)劑模擬組在模擬體液浸泡1-4個(gè)月CLSM照片，顯示整個(gè)混合層沒(méi)有發(fā)生再礦化，很容易觀(guān)察到浸潤(rùn)蘇丹明B貫穿混合層全層，厚約20-30μm。FL粘結(jié)劑礦化組在再礦化液浸泡1-3個(gè)月CLSM照片亦可見(jiàn)整個(gè)混合層浸潤(rùn)蘇丹明B，厚約25-30μm；浸泡第4個(gè)月時(shí)，顯示蘇丹明B浸潤(rùn)的混合層厚約15μm，熒光沒(méi)有貫穿全層，混合層中低部出現(xiàn)兩條長(zhǎng)約5μm的窄熒光減弱帶，提示該區(qū)域發(fā)生礦物的再沉積。
　　 xenoⅢ粘結(jié)劑模擬組在

10、模擬體液浸泡1個(gè)月CLSM照片，顯示整個(gè)厚約7μm混合層沒(méi)有發(fā)生再礦化；在模擬體液浸泡第2，3，4個(gè)月CLSM照片，可見(jiàn)整個(gè)混合層無(wú)再礦化發(fā)生呈現(xiàn)紅色均一熒光條帶，厚約10μm，較第1個(gè)月厚度顯著增加。xenoⅢ粘結(jié)劑礦化組在再礦化液浸泡1-4個(gè)月CLSM照片，可見(jiàn)浸潤(rùn)蘇丹明B的紅色熒光條帶厚度較一致，約8μm。
　　 ibond粘結(jié)劑模擬組在模擬體液浸泡1-4個(gè)月CLSM照片，顯示混合層浸潤(rùn)蘇丹明B并貫穿全層，厚度基本一致，約

11、20-30μm。ibond礦化組在再礦化液浸泡1個(gè)月CLSM照片，可見(jiàn)整個(gè)厚約30μm的混合層浸潤(rùn)蘇丹明B；在再礦化液浸泡第2個(gè)月CLSM照片，混合層厚度不一約25-30μm，觀(guān)察到混合層中部和底部出現(xiàn)若干處明顯的熒光減弱區(qū)，其厚度約為混合層厚度的1/2，長(zhǎng)度幾乎為鏡下可見(jiàn)混合層的全長(zhǎng)；在再礦化液浸泡第3個(gè)月CLSM照片，顯示厚約30μm的混合層浸潤(rùn)蘇丹明B，但明暗不一，可見(jiàn)混合層中部數(shù)處大小不一、形狀不規(guī)則的熒光減弱區(qū)，面積分布范圍在

12、10-80μm2；在再礦化液浸泡4個(gè)月CLSM照片，混合層厚約25μm，底部浸潤(rùn)蘇丹明B熒光染料，而上部約10μm×80μm的區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)明顯的熒光減弱區(qū)，甚至幾近穿透混合層表層，提示該區(qū)域發(fā)生了不同程度的礦物再沉積。
　　 結(jié)論：
　　 聚丙烯酸和聚乙烯磷酸雙仿生類(lèi)似物分子對(duì)FL、xenoⅢ及ibond粘結(jié)劑均顯示不同程度的再礦化效應(yīng)，其中對(duì)ibond粘結(jié)劑再礦化效應(yīng)最明顯，出現(xiàn)時(shí)間也最早；對(duì)FL粘結(jié)劑再礦化效應(yīng)次之，但