喹噁啉類及其代謝物對(duì)畜禽代表性病原微生物抑制活性研究.pdf

1、在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，威脅畜禽甚至人類健康的病原菌以及耐藥致病菌不斷出現(xiàn)，但是目前常用的藥物抗菌活性日益降低，因此迫切需要研發(fā)新的抗菌藥物。喹噁啉類化合物是一類人工合成的獸用抗菌藥，其代表藥物卡巴氧、喹乙醇、喹烯酮和乙酰甲喹曾有著廣泛應(yīng)用。已有的研究表明喹噁啉類對(duì)多種畜禽常見(jiàn)的致病菌具有抑制作用，特別是對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、豬痢疾短螺旋體等的作用較強(qiáng)。喹賽多是近年來(lái)研發(fā)的喹噁啉類新品種，有抗菌譜廣、毒性低、促生長(zhǎng)作用

2、顯著等優(yōu)點(diǎn)，可以作為卡巴氧、喹乙醇的替代藥物。根據(jù)國(guó)外最新的研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)，喹噁啉類還有其它的一些抗菌活性，因此喹噁啉類藥物還有許多潛在的抗微生物活性有待發(fā)掘。本課題選取喹噁啉類中的喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹為代表，以支原體、真菌、結(jié)核桿菌和病毒為研究對(duì)象，研究了喹噁啉類及其主要代謝物對(duì)畜禽特殊病原微生物的抑制活性，完善了喹噁啉類的抗菌譜。同時(shí)還進(jìn)行了喹噁啉類和相關(guān)藥物對(duì)支原體、結(jié)核桿菌的聯(lián)合藥敏試驗(yàn)，篩選出了聯(lián)合抗菌活性較好的藥物組合，這

3、將為喹噁啉類藥物的合理應(yīng)用以及進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　1.喹噁啉類藥物對(duì)真菌的MIC測(cè)定
　　在標(biāo)準(zhǔn)條件下采用微量稀釋法測(cè)定喹噁啉類及其主要代謝物對(duì)8個(gè)屬14株致病性真菌（白色念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、新型隱球菌、煙曲霉菌、犬小孢子菌、紅色毛癬菌和絮狀表皮癬菌）的最小抑菌濃度(Minimum inhibitoryconcentration，MIC)。同時(shí)測(cè)定了在厭氧條件下喹噁啉類藥物對(duì)深部真菌的MIC值。測(cè)

4、得在有氧條件下喹噁啉類三個(gè)原型藥物中，喹賽多對(duì)新型隱球菌的MIC值為16μg/mL，喹烯酮對(duì)犬小孢子菌MIC值可達(dá)到8μg/mL。試驗(yàn)結(jié)果顯示喹烯酮僅能抑制淺表真菌生長(zhǎng)，而喹賽多對(duì)深部真菌和淺表真菌均有一定抑制作用。喹噁啉類主要代謝物對(duì)受試真菌沒(méi)有顯示出抑制活性，推測(cè)原因可能是喹噁啉環(huán)上缺少兩個(gè)氮氧基團(tuán)。在厭氧條件下，喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹對(duì)深部真菌的MIC值略有降低。
　　2.喹噁啉類藥物對(duì)支原體的MIC測(cè)定及聯(lián)合藥敏試驗(yàn)

5、r>　　在標(biāo)準(zhǔn)條件下采用微量稀釋法測(cè)定喹噁啉類及其主要代謝物對(duì)支原體（雞毒支原體和豬肺炎支原體）的MIC，然后采用棋盤法進(jìn)行聯(lián)合藥敏試驗(yàn)。測(cè)得喹烯酮、喹賽多和乙酰甲喹對(duì)受試支原體的MIC值為8-32μg/mL，其中喹烯酮對(duì)雞毒支原體BG44T株的MIC值為8μg/mL。喹噁啉類主要代謝物對(duì)兩種支原體沒(méi)有顯示出抑制活性，推測(cè)原因可能是喹噁啉環(huán)上缺少兩個(gè)氮氧基團(tuán)。對(duì)雞毒支原體的聯(lián)合藥敏試驗(yàn)中，喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹與四環(huán)素的聯(lián)合作用的部分

6、抑菌濃度指數(shù)(Fractional inhibitory concentration index，F(xiàn)IC)最低，可達(dá)到0.75，為相加作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示三種藥物對(duì)支原體有一定抑制作用，并且可以與四環(huán)素進(jìn)行配伍使用。
　　3.喹噁啉類藥物對(duì)結(jié)核桿菌的MIC測(cè)定及聯(lián)合藥敏試驗(yàn)
　　在標(biāo)準(zhǔn)條件下采用MTT法測(cè)定喹噁啉類及其主要代謝物對(duì)結(jié)核桿菌(牛分支桿菌、結(jié)核桿菌H37Ra和H37Rv)的MIC，然后采用棋盤法進(jìn)行聯(lián)合藥敏試驗(yàn)。測(cè)

7、得喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹對(duì)牛分枝桿菌和結(jié)核桿菌強(qiáng)毒株H37Rv的MIC值為4-8μg/mL。喹噁啉類主要代謝物對(duì)兩種結(jié)核桿菌均沒(méi)有抑制活性，推測(cè)原因可能是喹噁啉環(huán)上缺少兩個(gè)氮氧基團(tuán)。對(duì)結(jié)核桿菌的聯(lián)合藥敏試驗(yàn)中，喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹與利福平的聯(lián)合作用的FIC指數(shù)最低，可達(dá)到0.75，為相加作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示三種藥物對(duì)受試結(jié)核桿菌均有較好的抑制活性，并且可以與利福平進(jìn)行配伍使用。
　　4.喹噁啉類藥物對(duì)病毒的抑制活性試驗(yàn)

8、　　采用細(xì)胞病變法和MTT法測(cè)定喹噁啉類及其主要代謝物對(duì)豬細(xì)小病毒、豬藍(lán)耳病毒以及雞傳染性法氏囊病毒的抑制活性。結(jié)果測(cè)得在三種不同作用方式下，喹噁啉類及其主要代謝物均不能對(duì)相應(yīng)細(xì)胞起保護(hù)作用。因?yàn)樨i瘟病毒在體外增殖不能使細(xì)胞產(chǎn)生病變，所以本試驗(yàn)建立了SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法定量檢測(cè)病毒液中豬瘟兔化弱毒株的拷貝數(shù)，通過(guò)比較加藥前后病毒增殖曲線的差異來(lái)判斷喹噁啉類藥物是否具有抑制豬瘟病毒增殖的活性。結(jié)果測(cè)得加藥前后病毒增殖曲