喹噁啉類(lèi)藥物及其代謝物致人源肝細(xì)胞毒性研究.pdf

1、喹噁啉-1，4-二氧化物類(lèi)化合物具有優(yōu)良的促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和廣譜抗菌的作用，在國(guó)內(nèi)外養(yǎng)殖業(yè)中被廣泛使用，市場(chǎng)供求量巨大，主要代表藥物有喹乙醇、卡巴氧和喹烯酮等。由于潛在的致癌毒性，卡巴氧已經(jīng)在很多國(guó)家和地區(qū)被禁止使用，在我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)中，喹乙醇和喹烯酮市場(chǎng)占有率大，但毒性作用尤其是體外的細(xì)胞毒性研究報(bào)道較少，對(duì)由于兩藥殘留可能導(dǎo)致的人類(lèi)損傷研究更是匱乏。以人源細(xì)胞毒性為對(duì)象，研究喹乙醇和喹烯酮及其代謝物的毒性，對(duì)揭示兩藥殘留可能引起的安全性問(wèn)題

2、具有積極意義。為此，本文采用ChangLiver和L-02兩株人源肝細(xì)胞為生物材料，通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、細(xì)胞DNA損傷和流式細(xì)胞術(shù)等試驗(yàn)，檢測(cè)喹噁啉類(lèi)藥物中喹烯酮、喹乙醇及其主要代謝3-甲基喹噁啉-2-羧酸和脫二氧喹烯酮在不同作用劑量和作用時(shí)間下對(duì)肝細(xì)胞的影響。
　　 1、喹噁啉類(lèi)藥物及其代謝物的制備
　　 在本實(shí)驗(yàn)室已有的研究基礎(chǔ)上，采用鄰硝基苯胺等為反應(yīng)起始原料，通過(guò)化學(xué)方法合成制備脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧

3、酸，并在合成過(guò)程中采用薄層色譜法監(jiān)測(cè)脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸的合成反應(yīng)過(guò)程，通過(guò)重結(jié)晶純化被分析的各種化合物，根據(jù)定量分析中的面積歸一化法，采用高效液相色譜儀測(cè)定喹烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸的百分含量。試驗(yàn)結(jié)果表明：喹烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸的百分含量分別為98.50％、99.28％、98.88％和99.50％，基本滿足毒理學(xué)試驗(yàn)要求。
　　 2、喹噁啉類(lèi)藥物及

4、其代謝物對(duì)人源肝細(xì)胞增殖影響
　　 采用ChangLiver和L-02兩株人源肝細(xì)胞為生物材料，通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)和興奮效應(yīng)試驗(yàn)觀測(cè)四種化合物在不同作用劑量和作用時(shí)間下對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率，及其是否具有興奮效應(yīng)。結(jié)果顯示：高劑量喹烯酮和喹乙醇對(duì)ChangLiver細(xì)胞作用24h的最高抑制率分別達(dá)73.29％和31.88％，對(duì)L-02細(xì)胞作用24h的最高抑制率分別達(dá)76.51％和39.70％；同時(shí)，高劑量脫二氧喹烯酮和3-甲基喹

5、噁啉-2-羧酸對(duì)ChangLiver細(xì)胞作用24h的最高抑制率分別達(dá)20.02％和21.58％，對(duì)L-02細(xì)胞作用24h的最高抑制率分別達(dá)34.49％和22.29％。四種化合物對(duì)兩細(xì)胞均有抑制作用，且呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)性；興奮效應(yīng)除30μg/mL喹烯酮對(duì)L-02細(xì)胞組的OD值與對(duì)照組顯著差異外，其他刺激組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。
　　 3、喹噁啉類(lèi)藥物及其代謝物致人源肝細(xì)胞DNA損傷的研究
　　 采用單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)觀察喹

6、烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸對(duì)人員肝細(xì)胞DNA的損傷情況。結(jié)果顯示：喹烯酮和喹乙醇均可顯著誘導(dǎo)ChangLiver和L-02兩株細(xì)胞的DNA損傷（P<0.01），且喹乙醇導(dǎo)致的損傷比喹烯酮嚴(yán)重。脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸高劑量組也可顯著誘導(dǎo)兩株細(xì)胞的DNA損傷（P<0.01），且脫二氧喹烯酮致兩株細(xì)胞的損傷均比3-甲基喹噁啉-2-羧酸嚴(yán)重，但是二者均較喹烯酮和喹乙醇毒性小。
　　 4、喹噁啉類(lèi)

7、藥物及其代謝物對(duì)人源肝細(xì)胞周期的影響
　　 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)喹烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮及3-甲基喹噁啉-2-羧酸對(duì)人ChangLiver和L-02細(xì)胞周期的影響。結(jié)果顯示：喹烯酮和喹乙醇對(duì)細(xì)胞作用4h后，ChangLiver和L-02細(xì)胞的周期均有改變，G0/G1期細(xì)胞百分率均較對(duì)照組高，兩細(xì)胞均出現(xiàn)了G0/G1期阻滯現(xiàn)象；而代謝物脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸對(duì)細(xì)胞作用4h后，兩個(gè)細(xì)胞的周期也發(fā)生改變，對(duì)Chang