無機砷及其代謝物對人真皮成纖維細胞毒性作用的實驗研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)人真皮成纖維細胞，用無機砷及其代謝物進行染毒，觀察染毒后細胞增殖、周期及凋亡，并檢測DNA修復(fù)相關(guān)的XPA、XPC、PARP1、ERCC3基因的表達變化，探討砷及其代謝物導(dǎo)致細胞皮膚損傷的分子機制。
　　方法：1、從6～10歲的8例健康兒童志愿者中，取包皮組織進行原代培養(yǎng)、分離人真皮成纖維細胞(Fibroblast)。傳代培養(yǎng)至第10代后，分別以無機砷化合物亞砷酸鈉(Sodiumarsenate，Na2AsO2)、二

2、甲基胂酸(Dimethylarsinic arsenical，DMAⅤ)、單甲基胂酸(Monomethylated arsenical，MMAⅢ)進行染毒，混勻分為4組，即高、中、低、對照組。在72 h后，四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞增殖，檢測不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、25μmol/L)對人真皮成纖維細胞體外增殖的變化。2、流式細胞儀(Flo

3、w cytometer)檢測不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII(0μmol/L、5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L)刺激人真皮成纖維細胞的凋亡和周期變化狀況。3、通過實時熒光定量(Real-Time Quantitative PCR)檢測不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII(0μmol/L、5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L)刺激人真皮成纖維細胞后，修復(fù)基因XPA、XPC、PARP1

4、、ERCC3的表達水平。
　　結(jié)果：1、人真皮成纖維細胞通過MTT比色法檢測得出結(jié)果：和對照組對比，人真皮成纖維細胞經(jīng)不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII刺激后，吸光度值發(fā)生變化，存在劑量-反應(yīng)關(guān)系(P<0.05)；2、用0μmol/L、5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L的iAsIII、DMAV、MMAIII的濃度作用人真皮成纖維細胞，G0/G1期細胞比例明顯下降(P<0.05)，G2/M期和S期細胞比例

5、較對照組明顯增加(P<0.05)；高、中劑量iAsIII、DMAV、MMAIII處理組細胞G1期細胞所占百分?jǐn)?shù)增多，提示細胞在G1期出現(xiàn)阻滯的趨勢，G2和S期細胞所占百分?jǐn)?shù)較少。3、XPA、XPC、PARP1、ERCC3在iAsIII、DMAV、MMAIII藥物作用下，mRNA在0~10μmol/L濃度的表達量出現(xiàn)上升趨勢，而隨著iAsIII、DMAV、MMAIII藥物作用濃度的增加，在15~25μmol/L濃度的mRNA表達量顯示有下

6、降趨勢，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：在細胞增殖試驗中，不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII誘導(dǎo)人真皮成纖維細胞后，吸光度產(chǎn)生了明顯的變化，0~10μmol/L濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII對人真皮成纖維細胞有促進細胞增殖作用，而15~25μmol/L濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII對人真皮成纖維細胞有抑制細胞增殖作用。0~10μmol/L濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII對人真