周期性機械拉伸對人真皮成纖維細胞增殖及膠原蛋白代謝的影響.pdf

1、皮膚創(chuàng)面愈合是一個復雜而有序的動態(tài)生物學過程，依賴于成纖維細胞與細胞外基質(zhì)間的相互影響、相互作用。正常生理狀態(tài)下，人真皮成纖維細胞處于皮膚張力作用下，成纖維細胞的增殖、分化、膠原蛋白代謝及基因表達等生物學過程都與其所處的力學環(huán)境有關(guān)。了解與調(diào)控張力作用下成纖維細胞的生物學行為是促進傷口愈合、提高愈合質(zhì)量、預防瘢痕異常增生等皮膚疾病及慢性難愈性創(chuàng)面的基礎與關(guān)鍵。體外研究周期性機械應力刺激對成纖維細胞生物學行為的影響，有助于進一步了解皮膚創(chuàng)

2、面愈合的生物學機制，為皮膚疾病的治療方法及評估提供重要參考。本實驗通過FX-4000柔性基底應變加載系統(tǒng)對人真皮成纖維細胞進行力學環(huán)境培養(yǎng)，研究力學刺激對成纖維細胞增殖及膠原蛋白基質(zhì)代謝的影響，主要研究內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　1.采用膠原酶消化法原代提取與培養(yǎng)人真皮成纖維細胞，以3×104/ml密度接種于裱襯Ⅰ型膠原蛋白的柔性細胞6孔培養(yǎng)板，采用FX-4000柔性基底應變加載系統(tǒng)對人真皮成纖維細胞施加頻率為0.1Hz、拉伸幅度分別為

3、10％和20％的周期性機械拉伸，并于拉伸后24h和48h提取細胞mRNA、收集細胞及細胞培養(yǎng)液上清，以無壓力培養(yǎng)為靜態(tài)對照。
　　2.采用流式細胞儀檢測細胞周期，分析S期占整個細胞周期的百分比，S期代表細胞增殖特性，S期所占百分比越高，表明細胞增殖越旺盛。實驗結(jié)果表明:與靜態(tài)對照組比較，10％拉伸幅度作用24h后，S期占細胞周期的比例顯著增高，隨著時間的推移，48h，S期占細胞周期的比例降低。成纖維細胞能夠?qū)?.1Hz、拉伸幅度1

4、0％、拉伸24h的力學刺激作出反應，改變細胞周期，促進成纖維細胞增殖，拉伸48h后反而下降。
　　3.周期性機械拉伸后，提取細胞內(nèi)總RNA，收集細胞培養(yǎng)液上清，采用實時熒光定量PCR方法研究各組成纖維細胞內(nèi)Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達;ELISA方法檢測各組上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的濃度。實驗結(jié)果表明:10％拉伸幅度作用24h、48h及20％拉伸幅度作用24h均可以促進成纖維細胞Ⅰ型膠原蛋白mRNA的表達;10％拉伸幅度作用24