題目1：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎基因治療的實(shí)驗(yàn)研究——攜帶人白介素1受體拮抗劑、人白介素10表達(dá)序列的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的構(gòu)建及體外實(shí)驗(yàn);題目2：核轉(zhuǎn)錄因子κB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:構(gòu)建攜帶hIL-1Ra或hIL-10表達(dá)序列的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒,并檢測重組逆轉(zhuǎn)錄病毒對體外培養(yǎng)的兔滑膜細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況和目的基因的表達(dá)水平與持續(xù)時間.方法:1.分離人外周血單個核細(xì)胞,提取RNA,RT-PCR擴(kuò)增目的基因并純化.2.酶切、連接目的基因與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN,篩出陽性克隆,測序鑒定.3.擴(kuò)增重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN-hIL-1Ra、pLXSN-hIL-10,分別與輔助質(zhì)粒pVSVG通過磷酸鈣-共沉淀法共轉(zhuǎn)染GP2

2、-293包裝細(xì)胞,收集病毒,鑒定并測定滴度.4.將獲得的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒rRV-hIL-1Ra、rRV-hIL-10分別轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的兔滑膜成纖維樣細(xì)胞.RT-PCR測定目的基因mRNA表達(dá)水平與時間的關(guān)系.免疫組化與western blotting測定目的蛋白的表達(dá)水平與持續(xù)時間.題目2：核轉(zhuǎn)錄因子κB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜中的表達(dá)及意義;目的:檢測核轉(zhuǎn)錄因子κB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜組織中的表達(dá)及活化情況,初探NFκB在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中