RNA干擾靶向TNF基因治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的 本研究擬根據(jù)人腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)基因序列設(shè)計小發(fā)卡RNA(short hairpin RNA，shRNA)，構(gòu)建高效真核表達載體，通過轉(zhuǎn)染人滑膜細胞觀察其表達，探討通過RNA干擾(RNAinterference，RNAi)抑制TNF基因表達治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis, RA)的可行性。 方法 根據(jù)GeneBank中人TNF mRN

2、A全長開放讀框(NM_000594)，設(shè)計擴增人TNF完整開放讀框序列的PCR引物、探針及干擾序列。以復(fù)合陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)，重組真核表達載體轉(zhuǎn)染人滑膜細胞。收集轉(zhuǎn)染后12h、24h、48h、72h和第7d細胞培養(yǎng)上清液，實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測培養(yǎng)上清液中TNF表達量，分析重組真核載體的轉(zhuǎn)染表達情況。應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理，P<0.05作為差別有顯著性標(biāo)準。 結(jié)果 人腫瘤壞死因子真核表達載體p

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