慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠腦海馬cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白表達的研究.pdf

1、前言抑郁癥是一種常見的精神疾病，具有較高的復發(fā)率和終生患病率。越來越多的研究表明，神經(jīng)元可塑性和細胞順應(yīng)性的損害參與到抑郁癥的發(fā)病的病理生理過程中來。海馬神經(jīng)元損傷是神經(jīng)系統(tǒng)可塑性調(diào)節(jié)中的一個重要環(huán)節(jié)，在研究抑郁癥病因和發(fā)病機制中占有重要地位。慢性應(yīng)激可引起大腦器質(zhì)性損害，尤其是海馬結(jié)構(gòu)和功能的損害，最終誘發(fā)抑郁癥。CREB是一種細胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，參與了多種與神經(jīng)元可塑性調(diào)節(jié)有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導通路的調(diào)控，在神經(jīng)元可塑性和細胞順應(yīng)性的調(diào)

2、節(jié)中起著重要作用。本研究通過觀察慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠腦海馬CREB的表達情況，以探討慢性應(yīng)激所致抑郁癥的腦損傷和神經(jīng)保護機制。 實驗材料1.實驗動物采用雄性Wistar大鼠48只，體重180～220克，由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供。 2.主要試劑兔抗大鼠CREB抗體(CellSignalingTechnology，＃9192)；生物素標記的山羊抗兔IgG，SABC免疫組化染色試劑盒，DAB顯色劑(以上購自北京中杉公司)

3、；硝酸纖維素膜購于上海華美生物制劑公司。 3.實驗儀器YSD-4G型藥理生理實驗多用儀；MetaMorph/CoolSnapfx/Ax70計算機圖像分析系統(tǒng)。 實驗方法1.動物分組依Open—field法評分將大鼠隨機分為實驗組1，實驗組2，對照組1，對照組2各12只。 2.抑郁模型制作第1～21天實驗組大鼠每天隨機接受不同的刺激。第22天所有大鼠再次采用Open—field法評定行為。 3.CREB的檢

4、測實驗組1和對照組1的大鼠經(jīng)多聚甲醛灌流固定后剝?nèi)∪X，制作含海馬的石蠟切片，采用特異性抗體的免疫組織化學方法檢測海馬CA3區(qū)和齒狀回中CREB的含量。實驗組2和對照組2的大鼠直接斷頭處死后剝離海馬，采用Westernblot法測定海馬CREB的含量。 實驗結(jié)果1.體重和開場行為評定：實驗組大鼠體重顯著低于對照組(P＜0.01)；水平穿越格數(shù)減少(P＜0.01)；直立次數(shù)減少(P＜0.01)；修飾次數(shù)減少(P＜0.01)。

5、 2.CREB的表達：免疫組織化學染色中實驗組大鼠海馬CA3區(qū)和DG區(qū)CREB的表達明顯低于對照組(P＜0.05)。WesternBlot實驗中實驗組大鼠CREB蛋白含量明顯低于對照組(P＜0.05)。 結(jié)論1.慢性應(yīng)激抑郁模型的大鼠體重降低，探究行為和修飾行為減少。2.慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬CA3區(qū)和齒狀回神經(jīng)元CREB表達的水平顯著低于對照組；海馬CREB蛋白的含量顯著低于對照組。 3.CREB可能參與了慢性應(yīng)激