睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬BDNF與microRNA-10b表達(dá)的影響.pdf

1、背景：
　　睡眠剝奪具有抗抑郁效果發(fā)現(xiàn)已久，但其具體的分子機(jī)制尚不明確。據(jù)有關(guān)研究表明，抑郁癥的發(fā)生與海馬神經(jīng)元再生障礙有著密切的關(guān)系，腦源性營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)在抑郁癥的病理生理機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，而成為目前研究的重要抗抑郁靶點(diǎn)之一。大量研究報(bào)道其可作為檢測治療效果的一個(gè)重要指標(biāo)。MicroRNA(miRNA)是一類在進(jìn)化上高度保守的內(nèi)源性長約22 nt的非編

2、碼小分子RNA，目前認(rèn)為，miRNA對神經(jīng)元生成具有決定性作用，大量研究表明miRNA與抑郁癥有著密切的關(guān)系，因此，本研究從microRNA-10b與BDNF在抑郁模型大鼠海馬中的表達(dá)量變化及其表達(dá)關(guān)系來探討睡眠剝奪的抗抑郁效果起效機(jī)制。
　　目的：
　　(1)對大鼠慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激抑郁模型（Chronic unpredictable mildstress，CUMS）進(jìn)行行為學(xué)評價(jià)。研究氯丙咪嗪聯(lián)合睡眠剝奪對抑郁模型大鼠

3、行為學(xué)的影響。
　　(2)檢測各組大鼠海馬中BDNF及microRNA-10b的表達(dá)及分析它們之間的關(guān)系，探討氯丙咪嗪聯(lián)合睡眠剝奪在抗抑郁治療中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　培育90只雄性SD大鼠，其中10只作為正常對照組，80只采用21天模式化慢性溫和不可預(yù)知1應(yīng)激刺激法建立抑郁模型，成功制模后再進(jìn)行分組，具體分組如下:正常組（10只）、抑郁組（10只）、睡眠剝奪組（10只）、氯丙咪嗪一周組（10只）、氯丙咪嗪兩周組

4、（10只）、氯丙咪嗪三周組（10只）、睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪一周組（10只）、睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪兩周組（10只）、睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪三周組（10只）。睡眠剝奪時(shí)間:第1、8、15天運(yùn)用多平臺水環(huán)境法進(jìn)行連續(xù)36h的全睡眠剝奪;氯丙咪嗪灌胃劑量為5mg/kg，1次/d，持續(xù)21d。21天后采用糖水消耗實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、Y迷宮實(shí)驗(yàn)及礦場實(shí)驗(yàn)等方法檢測各組大鼠行為學(xué)改變情況。采用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測各組大鼠海馬中BDNF基因與microR

5、NA-10b的表達(dá);采用雙熒光報(bào)告檢測microRNA-10b與BDNF的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　(1)行為學(xué)分析:抑郁組大鼠與正常組比較，4項(xiàng)實(shí)驗(yàn)得分都明顯下降（P＜0.05），睡眠剝奪組與抑郁組比較，4項(xiàng)實(shí)驗(yàn)得分都明顯上升(P＜0.05);氯丙咪嗪組與抑郁組比，其中氯丙咪嗪2周組與氯丙咪嗪3周組的4項(xiàng)實(shí)驗(yàn)得分均明顯上升(P＜0.05)，睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪組與抑郁組比，4項(xiàng)實(shí)驗(yàn)得分均明顯上升且睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪組1周組

6、上升最明顯(P＜0.05)。
　　(2)實(shí)時(shí)定量結(jié)果顯示:抑郁組的BDNF明顯低于正常組(P＜0.01)，而睡眠剝奪組的BDNF高于抑郁組(P＜0.05);氯丙咪嗪組與抑郁組相比，氯丙咪嗪2周組與氯丙咪嗪3周組中BDNF均明顯升高(P＜0.05);睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪組中BDNF均比抑郁組明顯升高(P＜0.05)且睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪組1周組較氯丙咪嗪組均有明顯的升高(P＜0.05)。
　　(3)實(shí)時(shí)定量結(jié)果顯示，抑郁組的m

7、icroRNA-10b明顯高于正常組(P＜0.01)，而睡眠剝奪組的microRNA-10b低于抑郁組(P＜0.05);氯丙咪嗪組與抑郁組相比，氯丙咪嗪2周組與氯丙咪嗪3周組中microRNA-10b均明顯降低(P＜0.05);睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪組中microRNA-10b均比抑郁組明顯降低(P＜0.05)且睡眠剝奪聯(lián)合氯丙咪嗪組1周組較氯丙咪嗪組均有明顯的降低(P＜0.05)。
　　(4)雙熒光報(bào)告結(jié)果顯示BDNF為micro