再生柞蠶絲素蛋白對小鼠間充質干細胞體外分化生長的支持作用.pdf

1、絲素蛋白是一種天然合成的高分子聚合物，作為手術縫線用于臨床已有一百多年的歷史。近年來，由于其低免疫原性，良好的生物相容性，緩慢的降解速度及特有的理化性質，絲素蛋白作為一種新的生物材料應用越來越受到歡迎。柞蠶絲素是除家蠶絲素外的另一大主要品種，在氨基酸組成上柞蠶絲素和家蠶絲素都主要由甘氨酸和丙氨酸兩種氨基酸組成，但柞蠶絲素中丙氨酸的含量比家蠶絲素要高，且含有豐富的精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸序列（RGD序列），更有利于細胞的粘附和生長。間充

2、質干細胞(MSC)是干細胞的一種，是屬于中胚層的一類多能干細胞，主要存在于結締組織和器官間質中，因能分化為間質組織而得名，具有亞全能分化潛能。間充質干細胞具有干細胞的共性：即自我更新，多向分化和歸巢的能力。在特定的環(huán)境下，能夠分化為多種組織細胞。而且易于富集和擴增，不涉及倫理問題，在細胞治療、組織器官修復、發(fā)育生物學、藥物等領域有著極為廣闊的應用前景，已被越來越廣泛的應用到組織工程中，是理想的種子細胞。隨著醫(yī)學生物研究地深入，細胞與基質

3、材料的相互作用己成為組織工程中關注的焦點。本實驗采用小鼠間充質干細胞株(C3H10T1/2)和綠色熒光蛋白轉基因小鼠的羊水干細胞(GFP—mAFS)這兩種小鼠間充質干細胞為研究對象，探討再生柞蠶絲素蛋白對這兩種干細胞體外分化發(fā)育的支持作用。
　　 第一部分再生柞蠶絲素蛋白對小鼠間充質干細胞株體外生長和分化的研究
　　 目的：探討再生柞蠶絲素蛋白對小鼠間充質干細胞株(C3HIOT1/2)體外生長和分化的支持作用，為再生柞蠶

4、絲素蛋白應用于組織工程學研究提供理論依據。
　　 方法：采用再生家蠶絲素蛋白、再生柞蠶絲素蛋白、I型膠原、普通細胞培養(yǎng)板為研究對象，觀察小鼠間充質干細胞株(C3H10T1/2)在這四種生物材料上的粘附、生長分化以及表面抗原的變化。利用光學顯微鏡觀察細胞生長形態(tài)；MTT法檢測細胞的增殖度；流式細胞儀測定細胞表型；誘導小鼠間充質干細胞(C3H10T1/2)向成脂肪細胞分化。
　　 結果：再生柞蠶絲素蛋白對于細胞生長、形態(tài)，細

5、胞表面抗原表達均無影響。MTT法檢測結果顯示在培養(yǎng)第6天C3H10T1/2細胞在再生柞蠶絲素膜上的增殖明顯(P<0.05)。-C3H10T1/2細胞能向成脂肪細胞分化。
　　 結論：本研究結果顯示再生柞蠶絲素蛋白在體外支持C3H10T1/2細胞的粘附，生長和分化，具有很好的細胞相容性。
　　 第二部分再生柞蠶絲素蛋白對小鼠羊水干細胞體外生長的研究
　　 目的：探討再生柞蠶絲素蛋白對小鼠羊水干細胞體外生長的支持作用

6、，為再生柞蠶絲素蛋白應用于組織工程學研究提供理論依據。
　　 方法：采用再生柞蠶絲素蛋白和普通細胞培養(yǎng)板為研究對象，觀察小鼠羊水干細胞(GFP—mAFS)在這兩種生物材料上的粘附、生長情況。利用倒置相差顯微鏡和倒置熒光顯微鏡觀察細胞的生長情況。
　　 結果：再生柞蠶絲素蛋白對細胞的粘附和生長形態(tài)均無影響。
　　 結論：本研究結果顯示再生柞蠶絲素蛋白在體外支持GFP—mAFS細胞的粘附，生長，具有很好的細胞相容性。