北京地區(qū)牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查及其抗體檢測(cè)間接ELISA方法的建立.pdf

1、為了解北京地區(qū)奶牛IBR流行情況，用IDEXX IBRgE抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)來(lái)自北京不同地區(qū)的2582份牛血樣。結(jié)果顯示，調(diào)查的地區(qū)均有IBRV抗體陽(yáng)性牛存在，其中昌平23.6％（245/1037），房山100%（50/50），延慶50.63%（202/399），順義60%（9/15），豐臺(tái)30.03%（164/546），密云43.46（232/535），總陽(yáng)性率為34.93%（902/2582）。血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，目前北京地區(qū)IBR

2、流行情況嚴(yán)重，應(yīng)盡快采取相應(yīng)的措施。
　　為建立一種檢測(cè)IBRV的方法，試驗(yàn)將IBRV接種MDBK細(xì)胞，以濃縮純化的IBRV作為包被抗原，建立了間接ELISA檢測(cè)方法。通過(guò)棋盤法確定了抗原的最佳包被濃度和血清的最佳稀釋倍數(shù)。抗原包被濃度20μg/mL，4℃過(guò)夜；PBST洗滌；3%BSA的PBST作為封閉液，37℃封閉2h；血清用PBST作1:80稀釋，100μL/孔，37℃度作用1h；HRP-兔抗牛IgG用3%BSA的PBST作1

3、:20000倍稀釋，37℃作用1h；TMB底物室溫避光顯色10min。陰、陽(yáng)性血清臨界值為0.240。特異性試驗(yàn)結(jié)果表明，IBRV陽(yáng)性血清被檢為陽(yáng)性，BVDV、牛白血病病毒、副結(jié)核病病毒陽(yáng)性血清均被檢為陰性。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明，IDEXX試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清1:640倍稀釋時(shí)仍能檢出陽(yáng)性抗體。與中和試驗(yàn)相比，特異性為100%（23/23），敏感性為82.76%（24/29）。批內(nèi)和批間重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于10%，表明該方法重復(fù)性