牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離鑒定與巢式—PCR診斷方法的建立.pdf_第1頁
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1、從濟(jì)南周邊奶牛養(yǎng)殖小區(qū)發(fā)生呼吸道癥狀的荷斯坦奶牛中，采集樣品，按常規(guī)方法處理后，接種MDBK細(xì)胞，盲傳4代后，分離到一株牛傳染性鼻氣管炎病毒。分離到的病毒在細(xì)胞上培養(yǎng)36h后，可形成直徑為1.0～1.5mm的噬斑。將病毒超離心濃縮后，在電鏡下可以觀察到具有牛傳染性鼻氣管炎病毒典型特征的病毒粒子；病毒可被牛傳染性鼻氣管炎病毒陽性血清中和；用IBRV特異性引物經(jīng)PCR擴(kuò)增出了其gB基因的高保守區(qū)，測(cè)序結(jié)果與GeneBank登陸號(hào)AF2583

2、47的序列完全吻合。通過以上試驗(yàn)均證實(shí)本次所分離到的病毒為牛傳染性鼻氣管炎病毒，命名為SD-IBRV。另外本試驗(yàn)還從該地區(qū)采集了217份牛血清樣品，進(jìn)行了血清流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明該地區(qū)牛傳染性鼻氣管炎病毒血清陽性率為28.6％(62/217)。以上研究為該病的診斷和防治提供了一定的依據(jù)。 目前牛傳染性鼻氣管炎病毒的診斷方法主要有：病毒的分離培養(yǎng)、中和試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)以及核酸探針等，但這些方法都

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