光動(dòng)力學(xué)人卵巢癌細(xì)胞裂解物的免疫源性及比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景:光動(dòng)力學(xué)治療是近年來(lái)興起的治療腫瘤的新技術(shù)。它的作用機(jī)制除了光敏劑吸收光后產(chǎn)生的氧活性物質(zhì)對(duì)腫瘤細(xì)胞或腫瘤血管內(nèi)膜的直接殺傷外，還可引起機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫反應(yīng)。許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，PDT治療后，機(jī)體產(chǎn)生了特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，用體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞經(jīng)PDT處理后的裂解物制成的疫苗，接種于同基因型動(dòng)物后，在體內(nèi)可產(chǎn)生針對(duì)同種腫瘤的特異性免疫反應(yīng)，在體外更有利于DC的分化、成熟。 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的日趨完善，為分

2、離、鑒定一個(gè)特定蛋白質(zhì)組中的蛋白質(zhì)提供了有力的技術(shù)平臺(tái)，也為尋找疫苗中特定的抗原成分提供了新的思路和方法。 目的:1、研究ALA-PDT在體外對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的殺傷作用，尋找制備PDT人卵巢癌細(xì)胞裂解物的光敏劑及光照劑量。 2、研究PDT人卵巢癌細(xì)胞裂解物在體外引起的免疫應(yīng)答。 3、分析PDT人卵巢癌細(xì)胞裂解物的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，尋找特異的蛋白。 方法:1、用MTT方法檢測(cè)ALA-PDT對(duì)四種人卵巢癌細(xì)胞株的體

3、外殺傷效果。 2、體外誘導(dǎo)培養(yǎng)DC，用PDT及凍融處理的人卵巢癌細(xì)胞裂解物負(fù)載DC，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC免疫表型的改變，用ELISA方法檢測(cè)IL-12分泌的改變；體外培養(yǎng)T細(xì)胞，用負(fù)載裂解物的DC誘導(dǎo)生成CTL，MTT方法檢測(cè)CTL對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。 3、用超濾離心法進(jìn)行PDT及凍融人卵巢癌細(xì)胞裂解物標(biāo)本的預(yù)處理，二維電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)分離，MALDI-TOF/MS和ESI-MS/MS對(duì)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。

4、 結(jié)果:1、在體外，ALA-PDT對(duì)四種人卵巢癌細(xì)胞株的殺傷效果不同，強(qiáng)弱順序?yàn)镾KOV3＞OVCAR3＞AO＞HO8910。用F12無(wú)血清培養(yǎng)，ALA濃度達(dá)到0.5Mm，激光能量為2.5J/cm2時(shí)，SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到最大抑制，為98％。ALA濃度達(dá)到1.0Mm，激光能量為2.5J/cm2時(shí)，OVCAR3細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到最大抑制，為97％。 2、在體外，人卵巢癌PDT裂解物較凍融裂解物更能促進(jìn)DC的成熟，表現(xiàn)為共刺激分子上調(diào)

5、，分泌更多的IL-12，能誘導(dǎo)CTL產(chǎn)生更強(qiáng)的特異性腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)。 3、超濾離心法是人卵巢癌細(xì)胞裂解物樣品有效的預(yù)處理方法。建立了重復(fù)性好，分辨率高的人卵巢癌細(xì)胞裂解物蛋白質(zhì)組的二維電泳圖譜，成功鑒定出了25個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，代表了19種蛋白。 結(jié)論:1、光動(dòng)力學(xué)人卵巢癌細(xì)胞裂解物比凍融卵巢癌細(xì)胞裂解物在體外更能促進(jìn)DC成熟，引發(fā)CTL的特異性腫瘤殺傷效應(yīng)，因此，具有更強(qiáng)的腫瘤疫苗樣作用。 2、超濾離心法可以成