人表皮光老化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：人表皮光老化的機(jī)制不明。本文以老年人的正常表皮為研究對(duì)象，分析曝光部位與非曝光部位的表皮差異蛋白，探討角質(zhì)形成細(xì)胞在光老化過(guò)程中的作用及分子機(jī)制，為揭示衰老的本質(zhì)，指導(dǎo)皮膚美容奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：收集老年人曝光部位和非曝光部位的正常皮膚，液氮保存。37℃生理鹽水中快速?gòu)?fù)溫，用DispaseⅡ分離出表皮，提取表皮總蛋白質(zhì)，并進(jìn)行2-DE分離，獲得表皮雙向凝膠電泳圖譜，PDQUEST軟件進(jìn)行圖像分析，經(jīng)強(qiáng)度校正、背景消減、

2、點(diǎn)檢測(cè)、匹配、ID校正，確定凝膠上差異蛋白點(diǎn)，挑選其中的蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫(kù)查詢，鑒定差異表達(dá)蛋白；最后用Western-blotting檢測(cè)不同部位蛋白的表達(dá)情況，驗(yàn)證差異表達(dá)蛋白。
　　 結(jié)果：本課題成功建立和優(yōu)化了人表皮雙向電泳技術(shù)，獲得了清晰、重復(fù)性高的表皮雙向電泳圖譜。經(jīng)PDQUEST軟件分析后，曝光組表皮蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為536±17，非曝光組表皮蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為528±15，比較兩組圖譜共確定差異點(diǎn)3

3、1個(gè)，其中15個(gè)蛋白點(diǎn)在曝光組中高表達(dá)，5個(gè)點(diǎn)特異表達(dá)；8個(gè)蛋白點(diǎn)在非曝光組中高表達(dá)，3個(gè)點(diǎn)特異表達(dá)。取其中差異明顯的10個(gè)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫(kù)查詢，成功鑒定了5個(gè)差異表達(dá)蛋白，發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白27（HSPB1）、膜聯(lián)蛋白A2（ANXA2）、絲裂原激活的蛋白激酶3（MK03）在老年人曝光部位的表皮中高表達(dá)，角蛋白80（K2C80）僅在老年人曝光部位表皮中表達(dá)，而谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶A2（GSTA2）在非曝光部位表皮中高表達(dá)，并通過(guò)Weste