YAP蛋白對(duì)肝細(xì)胞癌切除術(shù)后短期復(fù)發(fā)的影響.pdf

1、Yes-associated protein(YAP)是Hippo信號(hào)通路的下游靶分子，它能和TEAD轉(zhuǎn)錄子共激活從而介導(dǎo)細(xì)胞增殖。YAP的過(guò)表達(dá)可以誘導(dǎo)癌細(xì)胞增殖。來(lái)自香港的一項(xiàng)基于華人患者的研究表明YAP對(duì)于肝癌患者是一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因子。
　　目前，肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）在全球，特別是在亞洲是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。肝切除術(shù)仍是目前最有效的治療措施，但肝癌的術(shù)后的短期復(fù)發(fā)仍然是導(dǎo)致不良

2、預(yù)后的主要問(wèn)題。
　　有臨床證據(jù)表明肝癌切除術(shù)后會(huì)出現(xiàn)殘余癌組織的刺激性生長(zhǎng)，而肝再生能夠加速癌細(xì)胞增殖。所以，研究YAP與肝再生的關(guān)系非常必要，這將有助于我們探索YAP影響肝癌預(yù)后的分子機(jī)制。另外，確定YAP是否和乙肝病毒感染等臨床病理因素相關(guān)也很重要。
　　目的：
　　1.第一個(gè)目的是評(píng)價(jià)YAP和一些肝癌的病理學(xué)特征尤其是乙肝相關(guān)因素的相關(guān)性，尋找YAP影響預(yù)后的線索。
　　2.第二個(gè)目的是評(píng)價(jià)YAP和肝癌短

3、期復(fù)發(fā)及預(yù)后的關(guān)系。
　　3.第三個(gè)目的是研究YAP基因和蛋白水平在大鼠肝再生過(guò)程中的變化，探討再生肝中LATS1與YAP之間的關(guān)系。
　　4.第四個(gè)目的是評(píng)價(jià)下調(diào)YAP基因水平對(duì)人肝癌細(xì)胞增殖能力的影響以及對(duì)肝癌細(xì)胞中LATS1及TGF-β1水平的影響。
　　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)或方法：
　　1.借助組織芯片技術(shù)回顧性分析80例肝癌組織標(biāo)本。應(yīng)用免疫組化的方法觀察YAP在肝癌及對(duì)應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法涉及卡方檢驗(yàn)

4、、獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)以及生存分析。同時(shí)，我們觀察了大鼠肝癌細(xì)胞在大鼠肝臟成瘤過(guò)程中YAP蛋白的免疫組化染色。
　　2.建立70％肝切除的大鼠模型。在肝切除后0 h,4 h,48 h,104 h,115 h，and240 h取肝組織，每組5只。應(yīng)用定量PCR、蛋白印跡及免疫組化的方法檢測(cè)YAP的表達(dá)，應(yīng)用蛋白印跡方法檢測(cè)在肝再生過(guò)程中LATS1和YAP的同步變化。
　　3.以慢病毒載體攜帶YAP的RNA干擾序列轉(zhuǎn)染97H細(xì)胞。應(yīng)用

5、MTS和細(xì)胞周期分析技術(shù)比較轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組的細(xì)胞增殖狀態(tài)。另外，觀察了YAP在兩種不同轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞中的表達(dá)差別。
　　結(jié)果：
　　1. YAP與肝癌分化程度相關(guān)，與乙肝病毒感染的相關(guān)因素?zé)o關(guān)。肝癌平均發(fā)病年齡：YAP陽(yáng)性組(46.30±9.18)低于YAP陰性組(51.21±11.63)(P=0.047)。YAP陽(yáng)性組的患者在肝切除術(shù)后兩年內(nèi)死亡或復(fù)發(fā)的比例大于YAP陰性組，2年生存率低于YAP陰性組。
　　2.

6、 YAP蛋白水平在再生肝組織中明顯提高(2.5-3倍)，但是，與此同時(shí)，YAP mRNA水平出現(xiàn)輕度下降(1.47-2.17倍)(P=0.017)。然而，在人肝癌中YAP的蛋白和mRNA水平都高于癌旁組織。另外，在肝再生過(guò)程中，LATS1逐漸下降。
　　3.應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)下調(diào)YAP表達(dá)可以在體外抑制97H細(xì)胞生長(zhǎng)。此外，在比較97H和97L兩種細(xì)胞的YAP表達(dá)后我們發(fā)現(xiàn)：高表達(dá)YAP的97H細(xì)胞不僅具有高轉(zhuǎn)移潛能而

7、且具有高增殖能力。
　　結(jié)論：
　　1. YAP陽(yáng)性肝癌通常具有低分化特性，發(fā)病較早，并且預(yù)后不良；YAP的表達(dá)與乙肝病毒感染無(wú)明顯相關(guān)。
　　2.再生肝中YAP的升高緣于LATS1對(duì)YAP的磷酸化作用減低，肝癌細(xì)胞中的YAP的異常高表達(dá)源于YAPmRNA水平升高。
　　3.當(dāng)肝再生發(fā)生在YAP陽(yáng)性肝癌患者，殘余癌中的YAP蛋白水平進(jìn)一步提高，從而提高肝癌細(xì)胞增殖力，促進(jìn)早期復(fù)發(fā)。
　　4.下調(diào)YAP蛋白可