五酯膠囊的藥代動(dòng)力學(xué)及與他克莫司相互作用研究.pdf

1、中藥在我國(guó)及其他亞洲國(guó)家歷史悠久，已經(jīng)被證明對(duì)慢性病具有肯定的治療優(yōu)勢(shì)，具有不良反應(yīng)少、毒性低等特點(diǎn)，在歐美國(guó)家逐步受到重視。近年來，隨著全球“回歸自然”呼聲的提高，中藥應(yīng)用大幅增加。而且多是與化學(xué)合成藥物同時(shí)使用，尤其是人類免疫缺陷病毒(HIV)感染和癌癥患者為改善精神和生理狀況服用各種中藥的比例更高。以往大多數(shù)人認(rèn)為中藥來源于天然植物，安全無毒，也不會(huì)像化學(xué)藥一樣易發(fā)生藥物間相互作用。事實(shí)上，中藥含有多種生物活性成分，其化學(xué)組成與常

2、用化學(xué)藥類似，可通過協(xié)同或者拮抗作用共同發(fā)揮生理調(diào)節(jié)作用，也存在與多種類型的藥物發(fā)生相互作用的可能。以往人們多重視化學(xué)合成藥物之間的相互作用，最近有關(guān)中藥和化學(xué)藥相互作用而降低療效和導(dǎo)致毒副反應(yīng)的報(bào)道日益增多，已引起了醫(yī)藥界的廣泛關(guān)注。
　　 本課題以臨床常用免疫抑制劑他克莫司及純天然保肝藥南五味子為主要研究對(duì)象，以HPLC、LC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)為主要監(jiān)測(cè)手段，在對(duì)中藥南五味子藥材質(zhì)量控制研究和他克莫司及五酯膠囊體內(nèi)定性定量

3、分析方法建立的基礎(chǔ)上，深入探討兩者后體內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)特征和體外相互作用機(jī)制，具體內(nèi)容包括：
　　 1、本文以南五味子中的主要活性成分木脂素為研究對(duì)象，采用反相HPLC梯度洗脫法對(duì)南五味子藥材中8種主要木脂素成分進(jìn)行了多成分含量測(cè)定分析，同時(shí)運(yùn)用LC-MS/MS技術(shù)對(duì)各特征成分進(jìn)行了鑒別確證。并將檢測(cè)方法運(yùn)用到不同產(chǎn)地15批南五味子藥材及13批制劑五酯膠囊中，方法學(xué)考察良好。同時(shí)建立15批不同產(chǎn)地南五味子藥材及五酯膠囊的HPLC指紋

4、圖譜，該方法將多成分含量測(cè)定與指紋圖譜結(jié)合可操作性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，為更好地控制南五味子藥材質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)，并為體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究提供質(zhì)量穩(wěn)定可靠的供試樣品。
　　 2、本文采用LC-MS/MS技術(shù)首次建立了五酯膠囊中5種主要活性成分在大鼠血漿中的定量分析方法，即五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酚及五味子甲素。采用液-液萃取為血漿樣品前處理?xiàng)l件，以聯(lián)苯雙酯為內(nèi)標(biāo)，色譜分析采用AgilentZorbax SB-C18(3

5、.5μm，50×2.1 mm，I.D.)，流動(dòng)相為乙睛-甲醇-0.1％甲酸水(7∶2∶1，V/V/V)內(nèi)含0.1％甲酸水溶液，流速0.3mL/min，柱溫35℃。運(yùn)用Agilent G6410A型串聯(lián)質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式正離子檢測(cè)，并進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，在各自的生物樣品濃度范圍內(nèi)，均呈良好線性，r＞0.99；其各成分的線性范圍分別為：0.50-200ng/mL，0.50-50.0ng/mL，0.50-200ng/

6、mL，0.50-50.0ng/mL和0.50-50.0ng/mL，最低定量限分別為：0.5 ng/mL，日內(nèi)、日間精密度均小于15％，提取回收率均大于86％，該方法操作簡(jiǎn)單，選擇性好，靈敏度高，成功用于五酯膠囊大鼠血漿的動(dòng)力學(xué)研究。同時(shí)建立了靈敏度高、專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的LC-MS/MS方法同時(shí)測(cè)定人體血漿中的五酯膠囊中5種木脂素成分濃度，并研究五酯膠囊在中國(guó)健康人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。
　　 3、

7、本文建立了他克莫司在大鼠血漿中的定量分析方法，方法學(xué)考察均符合要求，并成功用于他克莫司與五酯膠囊合并用藥后藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用研究。結(jié)果顯示，他克莫司單獨(dú)使用，其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：Tmax為0.38±0.21h；Cmax為18.87±10.29ng/mL；AUC0→t為40.98±37.07ng h/mL；單次服用五酯膠囊后同時(shí)給藥他克莫司，大鼠全血中他克莫司藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)顯示：Tmax為1.54±0.15h；Cmax為59.42±30

8、.32ng/mL；AUC0→t為239.71±28.86ng h/mL，其達(dá)峰時(shí)間及達(dá)峰濃度與單獨(dú)服用他克莫司時(shí)均提高了近5倍；連續(xù)12天多次給藥五酯膠囊，在第12天同時(shí)給藥五酯膠囊及他克莫司，其他克莫司藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)顯示：Tmax為0.32±0.09h；Cmax為43.16±10.61 ng/mL；AUC0→t為89.21±26.39 ng h/mL。其各代謝參數(shù)與空白組相比有所提高或延長(zhǎng)，但與單次同服五酯膠囊及他克莫司相比，他克莫司

9、的各藥代參數(shù)有所下降，這一結(jié)果暗示五酯膠囊在體內(nèi)不同用量與時(shí)間上對(duì)他克莫司藥效上可能存在不同程度的協(xié)同或抑制，其作用機(jī)理可能更為復(fù)雜，當(dāng)協(xié)同強(qiáng)于抑制時(shí)，表現(xiàn)為協(xié)同作用。但就單次給藥五酯膠囊對(duì)他克莫司藥代動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生顯著的協(xié)同作用是肯定的。在此基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)采取隨機(jī)分組大鼠灌胃不同劑量五酯膠囊5min后，灌胃他克莫司(1.2mg/kg)，通過對(duì)各成分在大鼠血樣中測(cè)定所得的血藥濃度求算出各成分藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示，他克莫司達(dá)峰濃度(Cmax

10、)呈五酯膠囊劑量依賴性變化；他克莫司曲線下面積(AUC)隨五酯膠囊劑量的遞增也逐漸增大，直至五酯膠囊灌胃劑量為450mg/kg時(shí)，他克莫司曲線下面積(AUC)上升為最大值825.34 ng h/mL，隨后呈降低趨勢(shì)，出現(xiàn)這一平臺(tái)期可能與給藥劑量增大，胃中藥量過多難以及時(shí)吸收有關(guān)。
　　 4、本文采用Caco-2細(xì)胞模型為工具，在細(xì)胞水平上考察了五酯膠囊及其活性成分對(duì)他克莫司吸收的影響，試圖闡明五酯膠囊及其活性成分影響他克莫司吸收

11、過程的作用機(jī)制。結(jié)果顯示，五味子醇乙、五味子甲素、五味子酯甲及五酯膠囊溶液可明顯抑制他克莫司的吸收外排作用，且五味子甲素的這種抑制作用最強(qiáng)。Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)證明了五酯膠囊可通過抑制P-gp對(duì)他克莫司的外排作用而使他克莫司口服生物利用度增加。
　　 5、本文采用人肝微粒體體外孵育實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)考察了五酯膠囊及其活性成分對(duì)CYP3A4、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6這5種酶活性是否產(chǎn)生作用，從而影響他克